甘草是一种常用的中药 ,能和中缓急 ,润肺解毒 ;又能调和诸药 ,引药归经 ,为中药方剂的常见配伍成分。现代研究表明 ,甘草具有抗癌防癌、调节免疫、抗病毒多方面的药理作用 ,其主要有效成分为多糖、甘草酸及黄酮类化合物〔1～ 4〕。本文采用MTT法〔5〕分别研究比较了甘草三种有效成分对胃腺癌细胞株SGC 790 1的抑制作用 ,以及对小鼠脾脏淋巴细胞的增殖作用。1 材料1 1 药品 RPMI 16 40 ,Gibco公司产品 ;ConA ,MTT均为Sigma公司产品 ;胰蛋白酶 ,Ameresco分装。1 2 细胞株 人中分化胃腺癌细胞株SGC 790 1,购于上海细胞研究所 ,培养基为 10 %小牛血清 RP MI16 40 ,在 37℃、5 %CO2 条件下培养 ,常规体外传代。1 3 动物 昆明种小鼠 ,体重 18～ 2 2g ,购于江苏省原子医学研究所。2 方法2 1 甘草有效成分的制备 甘草有效成分按以下提取工艺提取 ,甘草多糖、甘草酸、甘草黄酮产品纯度均高于 5 0 % ,用PBS配成 5mg/ml,微膜过滤除菌 ,加样前用细胞培养基稀释到所需浓度。2 2 对胃腺癌细胞SGC 790 1的抑制实验 取对数生长期的胃腺癌细胞SGC 790 1,经 0 2 5 %胰蛋白酶消化后 ,用 10 %小牛血清 RPMI 16 40培养液调整细胞浓度为 1× 10 5/ml,接种于 96孔细胞培养板中 ,每孔 10 0 μl,置于 37℃、5 %CO2 条件下培养 2 4h后 ,加入 10 0 μl稀释成不同浓度的甘草有效成分 ,连续培养 72h ,实验结束前 4h加MTT液 (5mg/ml) ,继续孵育 ,弃上清液 ,加入DMSO 15 0 μl,振荡 10min ,酶标仪检测A570 。试验中以培养基对照组为空白。抑制率 % =(1-给药组A570 /细胞对照组A570 )× 10 0 %。2 3 对小鼠脾脏淋巴细胞的增殖作用 常规制备小鼠脾脏淋巴细胞〔6〕,经台盼蓝检测活细胞数目大于 95 % ,用 10 %小牛血清 RPMI 16 40调整细胞浓度为 3× 10 6 /ml,加样 2 4孔板 ,每孔 1ml,加入 0 5mlConA溶液 ,使之终浓度为 5 μg/ml ,加入 0 5ml稀释成不同浓度的甘草有效成分 ,置于 37℃、5 %CO2 条件下培养 72h ,实验结束前 4h加MTT液 (5mg/ml) ,继续孵育 ,离心 ,弃上清液 ,加入DMSO 1ml ,振荡 10min ,检测A570 。试验中以培养基对照组为空白。3 结果3 1 甘草有效成分对胃腺癌细胞SGC 790 1的抑制作用 实验结果表明 ,有效成分中甘草黄酮对SGC 790 1具有显著的抑制作用 ,抑制率可达83 4 1% ;甘草酸在 10 0 0 μg/ml的高浓度下 ,才显示出较强的抑制作用 ,抑制率为 4 4 5 5 % ,浓度较低时作用很弱 ;而甘草多糖基本上对SGC 790 1无抑制作用。结果见表 1。 表 1 甘草有效成分对胃腺癌细胞SGC 790 1的抑制作用浓度 (μg/ml)抑制率 (% )甘草多糖甘草酸甘草黄酮10 0 0 6 16 4 4 5 5 83 4 1 5 0 0 5 2 19 4 876 30 2 5 0 3 793 792 6 0 712 5 2 84 2 37 13 2 7 与对照组相比 , P <0 0 5 , P <0 0 13 2 甘草黄酮对胃腺癌细胞SGC 790 1作用的IC50 由 3 1实验结果可知 ,甘草黄酮能明显抑制SGC 790 1的生长 ,为了更好地研究其抗肿瘤活性 ,从而对其进行了较低浓度下的抑制实验 ,以推算IC50 。实验结果见图 ,甘草黄酮浓度与抑制作用之间存在着量效关系 ,通过线性拟合 ,推算出IC50 为 2 90 6 μg/ml。图 甘草黄酮对SGC 790 1的抑制作用3 3 甘草有效成分对脾脏淋巴细胞的增殖作用 从表 2可知 ,甘草多糖对ConA诱导的T淋巴细胞增殖具有较好的促进作用 ,但当浓度增至 10 0 μg/ml时 ,促进作用降低 ,当浓度为 5 0 μg/ml时 ,增殖刺激指数SI为 1 30 ;甘草酸、甘草黄酮则对ConA诱导的T淋巴细胞增殖起到了抑制作用。 表 2 甘草有效成分对脾脏淋巴细胞的增殖作用A57012 5 μg/ml 2 5 μg/ml 5 0 μg/ml 10 0 μg/ml甘草多糖 +ConA 0 1830 1830 2 36 0 196甘草酸 +ConA 0 15 30 14 70 14 80 135甘草黄酮 +ConA 0 185 0 186 0 16 4 0 16 0ConA对照组 0 1814 讨论本文的体外抗肿瘤实验表明 ,甘草有效成分中甘草黄酮明显抑制胃腺癌细胞SGC 790 1的生长 ,这可能与其清除胞内活性氧自由基ROS作用有关。近年报道证实 ,ROS是维持肿瘤细胞恶性增殖的必要成分 ,包括超氧阴离子自由基、羟自由基、过氧化氢等 ,其在胞内可能作为第二信使起转导生长信号的作用 ,而抗氧化剂的抑癌作用可能与其清除ROS的性质有关〔7〕。甘草酸在体外对胃腺癌细胞SGC 790 1基本无抑制作用 ,与文献报道相符合 ,甘草酸经胃酸水解或经肝中 β 葡萄糖醛酸酶分解形成甘草次酸 ,甘草酸的药理作用实质上是甘草次酸的效用。近年来的药理研究发现 ,甘草酸及甘草次酸类药物能防治病毒性肝炎、高脂血症和癌症等疾病 ,是有效的干扰素诱生剂及细胞免疫调节剂〔3〕。本实验表明甘草多糖对ConA诱导的淋巴细胞增殖有较好的促进作用 ,其作为生物多糖 ,主要是通过调节免疫 ,抑制变态反应 ,起到抗肿瘤的效果〔2〕,当浓度增加到 10 0 μg/ml时促进作用降低 ,可能说明了甘草多糖的免疫双向调节作用 ,也有可能是其它介质的抑制影响。甘草黄酮对淋巴细胞生长的抑制作用 ,可能是由于改变了细胞正常生长的环境 ,也可能是甘草黄酮在高浓度下对细胞具有一定的细胞毒。而甘草酸则很可能是由于改变细胞正常生长的环境 ,从而抑制了淋巴细胞的增殖。甘草有效成分体外抗肿瘤活性和免疫活性的研究@聂小华$江南大学生物工程学院!无锡214036
@尹光耀$无锡第三人民医院!无锡214041
@史宝军$江南大学生物工程学院!无锡214036
@敖宗华$江南大学生物工程学院!无锡214036
@陶文沂$江南大学生物工程学院!无锡214036甘草;;抗肿瘤;;免疫活性本文研究比较了甘草三种有效成分对胃腺癌细胞株SGC 790 1的抑制作用,以及对小鼠脾脏淋巴细胞的增殖作用。实验结果表明,甘草黄酮对SGC 790 1具有明显的抑制作用,IC50 为2 90 6 μg/ml,甘草酸在10 0 0 μg/ml的高浓度下才表现出一定的抑制作用,而甘草多糖基本无抑制作用;甘草多糖对ConA 诱导的脾脏淋巴细胞增殖具有较好的促进作用,而甘草酸、甘草黄酮则抑制淋巴细胞的生长。1 张宝恒,甘草药理作用研究进展药学学报,1993,10(11)∶688
2 王岳五,等甘草残渣中多糖GPS抗肿瘤作用的研究南开大学学报,2000,33(4)∶46
3 史桂兰,等甘草酸药理作用与临床作用研究进展天津药学,2001,13(1)∶10
4 贾国惠,等甘草中黄酮的药理作用研究进展中国药学杂志,1998,33(9)∶513
5 程宝鸾主编动物细胞培养技术广州:华南理工大学出版社,2000∶131
6 尹学念主编免疫学和免疫学检验实验指导北京:人民卫生出版社,1997∶39
7 陈瑞川,等天然抗氧化剂Isoverbascoside诱导人胃癌MGC 803细胞分化作用研究厦门大学学报,2001,40(4)∶936赴哂幸欢ǖ南赴尽６ 什菟嵩蚝芸赡苁怯捎诟谋湎赴Ｉさ幕肪?,从而抑制了淋巴细胞的增殖。甘草有效成分体外抗肿瘤活性和免疫活性的研究@聂小华$江南大学生物工程学院!无锡214036
@尹光耀$无锡第三人民医院!无锡214041
@史宝军$江南大学生物工程学院!无锡214036
@敖宗华$江南大学生物工程学院!无锡214036
@陶文沂$江南大学生物工程学院!无锡214036甘草;;抗肿瘤;;免疫活性本文研究比较了甘草三种有效成分对胃腺癌细胞株SGC 790 1的抑制作用,以及对小鼠脾脏淋巴细胞的增殖作用。实验结果表明,甘草黄酮对SGC 790 1具有明显的抑制作用,IC50 为2 90 6 μg/ml,甘草酸在10 0 0 μg/ml的高浓度下才表现出一定的抑制作用,而甘草多糖基本无抑制作用;甘草多糖对ConA 诱导的脾脏淋巴细胞增殖具有较好的促进作用,而甘草酸、甘草黄酮则抑制淋巴细胞的生长。1 张宝恒,甘草药理作用研究进展药学学报,1993,10(11)∶688
2 王岳五,等甘草残渣中多糖GPS抗肿瘤作用的研究南开大学学报,2000,33(4)∶46
3 史桂兰,等甘草酸药理作用与临床作用研究进展天津药学,2001,13(1)∶10
4 贾国惠,等甘草中黄酮的药理作用研究进展中国药学杂志,1998,33(9)∶513
5 程宝鸾主编动物细胞培养技术广州:华南理工大学出版社,2000∶131
6 尹学念主编免疫学和免疫学检验实验指导北京:人民卫生出版社,1
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