毒鼠强的化学名称为四亚甲基二砜四胺 ,分子式为Ｃ4Ｈ8Ｎ4Ｏ4Ｓ2 ,是一种白色粉末 ,对人畜有剧毒 ,其大鼠ＬＤ50 为0 1～ 0 3ｍｇ/ｋｇ<1> 。虽然我国于 1991年就禁止使用毒鼠强 ,但由于其制造成本低 ,作用迅速 ,仍被不少地方使用 ,中毒事(案 )件屡有发生。因此 ,如何快速有效地测定机体组织内毒鼠强的含量 ,成为毒物工作者迫切解决的课题。毒鼠强的测定方法主要有薄层层析法 (ＴＬＣ)、气相色谱法 (ＧＣ/ＮＰＤ) <2 > 等 ,本文以ＧＣ/ＭＳ法测定生物检材中毒鼠强的含量 ,方法快速准确。1 材料与方法1 1 仪器和试剂 5 973Ｎ型气相色谱 /质谱联用仪 (ＧＣ/ＭＳ ,美国安捷伦公司 ) ,带ＷＩＮＤＯＷＳＮＴ工作站 ;色谱柱 ,ＨＰ 5 (30ｍ× 0 2 5ｍｍ× 0 2 5 μｍ)弹性石英毛细管柱 ;毒鼠强标准溶液0 5ｍｇ/ｍｌ,公安部二所提供 ;丙酮、无水硫酸钠、氧化铝等均为分析纯。1 2
实验动物 家兔 4只 ,由解放军 15 0中心医院实验动物部提供。1 3 实验方法1 3 1 仪器条件 进样口温度 2 5 0℃ ,检测器温度 2 70℃ ,柱温 5 0℃ (5ｍｉｎ) 3 0℃ /ｍｉｎ2 0 0℃10℃ /ｍｉｎ2 4 0℃ (5ｍｉｎ)程序升温 ;分流比 10∶1;ＥＩ源 70ｅＶ ;载气Ｈｅ。1 3 2 标准谱图建立 用毒鼠强标准液稀释成 5ｎｇ/ μｌ的应用液 ,进样 1μｌ,质量范围 30～ 35 0ａｍｕ ,扫描生成毒鼠强的质谱图 ,其特征离子碎片为Ｍ/Ｚ 4 2、92、12 1、132、2 12、2 4 0 ,将此质谱图添加到自建库作为毒鼠强标准谱图。1 3 3 标准曲线制作 取毒鼠强标准液用丙酮配制成每 μｌ含 2 5、5 0、7 5、10 0ｎｇ的工作液 ,分别按上述仪器条件用ＳＩＭ方式进样 1μｌ,每样进两针 ,得到各自的毒鼠强总离子流图。1 3 4 回收率测定 取空白肝组织 4份 ,每份 2ｇ ,空白血 2份 ,每份 1ｍｌ,分别添加标准毒鼠强 5 μｇ ,用无水硫酸钠研成干砂状 ,然后无损地移入三角烧瓶 ,以丙酮提取 3次 (30ｍｌ、2 0ｍｌ、15ｍｌ) ,合并提取液过净化柱 (自下而上 ,无水硫酸纳 1 0ｇ,三氧化二铝 2 0ｇ ,活性炭 0 2ｇ ,无水硫酸钠 3 0ｇ ,以丙酮预淋洗柱子 ) ,再以 10ｍｌ丙酮淋洗 ,水浴浓缩至近干 ,定容0 5ｍｌ备用。选择提取离子 2 12、4 2、92、2 4 0、12 1、132 ,按 1 3 1条件各进样 1ｍｌ。1 3 5
动物实验 取健康家兔 3只 ,体重 2 6ｋｇ左右 ,固定后分别灌入市售鼠药 (商品名全杀光 ,经测定毒鼠强含量 2 0ｍｇ) ,并灌入温水 2 0ｍｌ。 3只兔子很快出现四肢僵直、呼吸加快、抽搐、痉挛等症状 ,35ｍｉｎ后相继死亡。解剖提取肝脏、
胃组织、血液作检材 ,用上述方法测定各脏器内的毒鼠强含量。另取 1只家兔为空白对照2 结果2 1 回收率实验结果 毒鼠强的标准工作曲线为ｙ =1.2 9×10 4Ｘ - 16 5 0 ,ｒ =0 .981。由此计算毒鼠强的平均回收率为73 5 5 %± 0 5 5 (ｎ =6 ) ,ＲＳＤ为 0 75 %。2 2 动物实验结果 见表 1(空白对照均为阴性 )。表 1 中毒兔部分组织的毒鼠强含量 (ｎｇ/ｇ)家兔肝组织胃组织血液1号 1 581 81 1 3 0 2 7862号 1 92 861 76 0 52 553号 1 0 85 72 46 0 581 52 3 案例应用 某饲养场的 3头奶牛在进食后 ,突然出现狂躁、抽搐、痉挛、站立不稳等症状 ,很快死亡。经我们用上述方法检验 ,在牛胃内容物中检出毒鼠强 ,含量为 0 84 5 μｇ/ｇ。某男 ,5 7岁 ,于去年某日被发现中毒 ,主要症状为神志不清、躁动不安、抽搐 ,经医院抢救无效死亡。解剖后提取其肝组织、胃组织及胃内容送我处鉴定。用上述方法检测 ,各组织中均检出毒鼠强 ,含量为肝组织 0 12 9μｇ/ｇ ,胃组织 7 0 2 7μｇ/ｇ ,胃内容 6 6 11μｇ/ｇ。3 讨论本实验意在为毒鼠强中毒案件提供一种快速、准确的定性定量方法。利用自建毒鼠强谱库 ,对毒鼠强的 6个特征离子碎片进行选择性检测 ,提高了灵敏度。本方法用于生物检材中的毒鼠强检测 ,可以在较短的时间里完成鉴定 ,尤其对意外中毒的病人抢救提供了帮助。目前关于毒鼠强的检测方法 ,报道的并不多见。气相色谱法 (ＧＣ/ＮＰＤ) <3 > 测定毒鼠强 ,灵敏度较高 ,但是以保留时间作为定性依据 ,容易受组织成分的干扰 ,影响检测准确性。而采用气相色谱 /质谱 (ＧＣ/ＭＳ)联用法选择离子检测 (ＳＩＭ) ,排除了干扰 ,再通过背景扣除 ,使检测更准确 ,灵敏度也较高。从实验动物中毒后的检材中检出的毒鼠强与标准谱对照 ,匹配度达 93% ,丰度与标准谱图接近 ,较之体外添加的实验 ,更具科学性 ,与实际相符。动物实验结果表明 ,胃组织内毒鼠强含量远大于其他脏器 ,而肝、血中含量较少 ,同报道一致。另外也说明毒鼠强作用很强 ,中毒致死量很小。据报道 ,毒鼠强的毒性接近氰化钾的 10 0倍<4> ,血中少量即可致死 ,这也是某些疾病怀疑毒鼠强中毒而不能检出的原因。毒鼠强提取回收率平均为 73 5 % ,主要是由于生物检材中杂质的存在 ,需要较多净化过程 ,造成毒鼠强被吸附而损失 ,今后应探索改进方法 ,提高回收率生物检材中毒鼠强的检测@马锦琦$洛阳医专法医学系!河南洛阳471003
@周海梅$洛阳医专法医学系!河南洛阳471003
@李朴$洛阳医专法医学系!河南洛阳471003生物检材;;
毒鼠强;;检测目的 研究生物检材中毒鼠强的快速检测方法。方法
气相色谱 /质谱 (GC/MS)联用法选择离子检测 (SIM)。结果 检测生物体内存在的毒鼠强 ,提取回收率为 73 5 % ,RSD为 0 75 %。结论 利用该法可快速检出毒鼠强 ,为临床诊断及刑事案件鉴定提供依据<1> 关福玉,张亚超,黄绍清血样和尿样中毒鼠强气相色谱测定方法的研究及初步应用
色谱,1993,11(6)∶333
<2> 沈敏,向平毒鼠强中毒的固相微萃取和GC/NPD快速测定中国药学杂志,2000,35(5)∶341
<3> 周建华,康凤周生物检材中毒鼠强的气相色谱测定法刑事技术,1994,(1)∶3
<4> 周海梅毒鼠强中毒的检验与救治洛阳医专学报,2001,19(2)∶179钇? 洛阳医专法医学系!河南洛阳471003生物检材;;毒鼠强;;检测目的 研究生物检材中毒鼠强的快速检测方法。方法 气相色谱/质谱 (GC/MS)联用法选择离子检测 (SIM)。结果 检测生物体内存在的毒鼠强 ,提取回收率为 73 5 % ,RSD为 0 75 %。结论 利用该法可快速检出毒鼠强 ,为临床诊断及刑事案件鉴定提供依据<1> 关福玉,张亚超,黄绍清血样和尿样中毒鼠强气相色谱测定方法的研究及初步应用色谱,1993,11(6)∶333
<2> 沈敏,向平毒鼠强中毒的固相微萃取和GC/NPD快速测定中国药学杂志,2000,35(5)∶341
<3> 周建华,康凤周生物检材中毒鼠强的气相色谱测定法刑事技术,1994,(1)∶3
<4> 周海梅毒鼠强中毒的检验与救治洛阳医专学报,2001,19(2)∶179
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