1 前 言中药在我国有数千年历史,但其组方一直以经验为主,难于实现大规模工业化生产.当今 ,液相色谱等先进设备广泛用于中药有效成分的分离鉴定,为我国中药的发展和走向世界打下了坚 实的科学基础.为进一步发挥这些先进设备的作用,本文对ＨＰＬＣ在中药组方中的应用进行了研 究.供试纯中药复方制剂由Ａ,Ｂ,Ｃ三部分组成.其中Ａ部分是中药中提取出来的蛋白酶.Ｂ和 Ｃ部分主要含生物碱、蛋白质及其它成分.Ａ与Ｂ和Ｃ组方后引起复方制剂中肽含量的变化,肽是 此中药制剂的有效成分.肽含量高低直接关系到此复方制剂的药效.因此,研究其配伍后肽的变化 规律,对于优化配方和指导该复方制剂的生产,以及生产过程中产品质量的控制具有重要意义.为此,本文对该复方制剂配伍后肽含量变化做了初步研究,现将结果报告于后.2 实验部分21 仪器和试液Ｂｉｏｓｙｓ550ＨＰＬＣ(Ｂｅｃｋｍａｎ)柱:反向Ｃ8柱,流动相:0 05%ＴＦＡ的水∶含0 05%ＴＦＡ的乙晴=60∶40,流速:0 8ｍＬ/ｍｉｎ.Ａ:从药材中提出的酶蛋白.Ｂ:中药提取物(主要含蛋白质、生物碱).Ｃ1Ｃ2:其它成分.2 2 试验方法2 2 1 配方筛选试验将Ａ配成浓度为1ｍｇ/ｍＬ溶液,固定Ｂ为2ｍＬ,先找出Ａ与Ｂ的最佳比例, 再找出Ａ+Ｂ与Ｃ的最佳配比(表1-3).表1 配方筛选1(定容体积50ｍＬ)Ｔａｂｌｅ 1 Ｓｉｆｔｉｎｇｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ1(Ｄｅｆｉｎｉｔｅｖｏｌｕｍｅ50ｍＬ)项目ＣＫ1ＣＫ21234567Ａ(ｍｇ)200-0 400 801 201 602 002 402 80Ｂ(ｍＬ)-2 002 002 002 002 002 002 002 00表2 配方筛选2(定容体积50ｍＬ)Ｔａｂｌｅ2 Ｓｉｆｔｉｎｇｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ2(Ｄｅｆｉｎｉｔｅｖｏｌｕｍｅ50ｍＬ)项目ＣＫ1ＣＫ2123456Ａ(ｍｇ)160-1 601 601 601 601 601 60Ｂ(ｍＬ)2 00-2 002 002 002 002 002 00Ｃ1(ｍＬ)-1 502 002 503 003 504 004 50表3 配方筛选3(定容体积50ｍＬ)Ｔａｂｌｅ3 Ｓｉｆｔｉｎｇｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ3(Ｄｅｆｉｎｉｔｅｖｏｌｕｍｅ50ｍＬ)项目1234567Ａ(ｍｇ)1 601 402 402 001 601 601 60Ｂ(ｍＬ)2 002 002 0002 002 002 00Ｃ1(ｍＬ)2 502 502 500Ｃ2(ｍＬ)2 002 503 002 2 2 肽的测定将制剂用膜滤器过滤,得清液用高效液相色谱仪测定.2 2 3 测定波长的确定将试液在190-390ｎｍ全谱扫瞄出现250ｎｍ和220ｎｍ两个吸收峰.其中250ｎｍ处吸收较弱,故确定220ｎｍ为检测波长.2 2 4 肽含量的计算色谱分析中肽的含量与色谱峰面积成正比,此处不测定肽的绝对含量.以峰面积作为肽的含量,各处理间进行对比分析.3 结果与讨论3 1 Ａ与Ｂ配伍后肽含量的变化见表4.表4 Ａ与Ｂ(2ｍＬ)配伍(配方筛选一)肽测定结果Ｔ ａｂｌｅ4 Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｐｅｐｔｉｄｅｔｅｓｔｉｎｇ:ＡＭｉｘｅｄｗｉｔｈ Ｂ(2ｍＬ)(Ｓｉｆｔｉｎｇｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ1)项目ＣＫ21234567峰面积Ｓ1867172 5173 13183 56185 27185 27236 41226 22ΔＳ--14 2-13 57-3 14-0 80-1 4349 7139 52ΔＳ/Ａ--35 50-16 96-2 61-0 50-0 7220 7114 11 从表4可以看出:当Ｂ为2ｍＬ时,随Ａ的加入,肽的峰面积即肽的含量总的来说是降低的.6号和7号肽含量增加可能是因为Ａ加入量太大了,分别为2 4和2 8引起的.这个量与原配方相差甚远故可以略去.4号和5号的ΔＳ降低最小.也就是加入Ａ后降低的肽最少.故Ａ的最佳用量为1 6-2ｍｇ.3 2 Ａ+Ｂ与Ｃ1配伍后肽含量的变化上面已经知道Ｂ为2ｍＬ时,Ａ的最佳范围是1 6-2ｍｇ,结合生产成本和原配方选用Ａ各1 6ｍｇ,作如下实验(即配方筛选二).见表5.表5 Ａ(1.6ｍｇ)+Ｂ(2ｍＬ)与Ｃ1配 伍(配方筛选二)肽测定结果Ｔａｂｌｅ2 Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｐｅｐｔｉｄｅｔｅｓｔ ｉｎｇ:Ａ(1.6ｍｇ)ａｎｄＢ(2ｍＬ)ｍｉｘｅｄｗｉｔｈＣ1(Ｓｉｆｔｉｎｇｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ2)项目ＣＫ1123456峰面积Ｓ21257260 76282 41423 61336 83385 60401 23ΔＳ-48 2464 84211 04124 26173 03188 67ΔＳ/Ｃ1-32 1334 9284 4241 4249 4447 17从表5可知:当Ａ为1 6ｍｇ时,Ｂ为2ｍＬ时,随Ｃ1的加入,肽的峰面积增加,3号的ΔＳ及ΔＳ/Ｃ1都达到最大,以后又下降.即3号中Ｃ1加入量为2 5ｍＬ时,复方制剂中肽的含量最高,故Ｃ1的最佳用量为2 5ｍＬ.3 3 Ａ+Ｂ与Ｃ2配伍后肽含量的变化即Ａ:1 6ｍｇ,Ｂ:2ｍＬ分别加入Ｃ22ｍＬ,2 5ｍＬ,3 0ｍＬ,3 5ｍＬ测定肽的峰面积分别为1513 98、1394 69、1857 04和1769 32,说明Ｃ2的配入量3ｍＬ最好.3 4 组方后的肽含量的变化据以上研究确定下列配方测定峰面积即肽的含量 新方Ⅰ新方Ⅱ新方Ⅲ Ａ 1 6ｍｇＡ 2 4ｍｇＡ 1 6ｍｇ Ｂ 2ｍＬＢ 2ｍＬＢ 2ｍＬ Ｃ1 2 5ｍＬＣ1 2 5ｍＬＣ2 3 0ｍＬ峰面积测定结果新Ⅰ=1114.28,新Ⅱ=1147.71,新Ⅲ=1857.04,旧配方为1098 61,四个配方中旧配方的含量最低.4 结 论(1)在组方中Ａ的用量达到1 6-2 0ｍｇ,高时也可达到2 4ｍｇ.(2)Ｃ1在组方中用量为2 5ｍＬ最好.(3)Ｃ2在组方中相对宽松2 0-3 0ｍＬ均可.(4)推荐配方为: Ａ 1 6ｍｇＡ 2 4ｍｇＡ 1 6ｍｇ Ｂ 2ｍＬＢ 2ｍＬＢ 2ｍＬ Ｃ1 2 5ｍＬＣ1 2 5ｍＬＣ2 3 0ｍＬ液相色谱仪用于中药组方的研究@李红林$川北医学院基础医学部!四川南充637007
@岳光$重庆碚陵制药厂!重庆北碚400700液相色谱;;肽含量;;中药组方用液相色谱仪对 中药组方后肽含量的变化进行了研究.筛选出了肽含量最高的组方,并在验证古方的基础上确定了 新方.<1>唐易全.肽化学研究中的高效液相色谱
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@岳光$重庆碚陵制药厂!重庆北碚400700液相色谱;;肽含量;;中药组方用液相色谱仪对 中药组方后肽含量的变化进行了研究.筛选出了肽含量最高的组方,并在验证古方的基础上确定了 新方.<1>唐易全.肽化学研究中的高效液相色谱.色谱,1990,8(6):368-371.
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