幽门螺杆菌 (Ｈｐ)感染与慢性胃炎、消化道溃疡、胃癌密切相关<1 ,2 > ,我国各地自然人群中的Ｈｐ感染率 (成人)均在 5 0 %以上 ,目前对Ｈｐ致病机制的研究已从细胞水平进展到分子和基因水平 ,对于Ｈｐ感染的诊断和治疗水平也经历了从单一抗菌药治疗、2种药物治疗到铋剂三重治疗的发展过程。由于人们越来越认识到化学合成药物的毒副作用、研究代价以及防治疾病的局限性 ,中医药的优势和特点逐渐为人们所认识和接受。本研究考察了单方黄连、枳实、紫草和复方逍遥汤、黄芪健中汤 5种中药制剂对Ｈｐ的杀灭作用 ,为探寻抗Ｈｐ的中药制剂提供实验依据。材料与方法1 实验材料1 .1 菌株 Ｈｐ1 1 63 9:由中国幽门螺杆菌科研协作组菌株管理与保藏中心提供。1 .2
中药制剂 单方为黄连、枳实、紫草 ;复方为逍遥汤、黄芪健中汤 ;均由大连友谊医院提供 ,置 4℃冰箱保存备用。1 .3 布氏肉汤血琼脂培养基 胰蛋白胨 1 0 ｇ ,葡萄糖 1 0 ｇ,酵母粉 2ｇ,氯化钠 5 ｇ ,重亚硫酸钠 0 .1 ｇ,琼脂 1 5 ｇ ,蒸馏水 1 0 0 0ｍＬ ,羊血液 8%～ 1 0 % ,抗生素混合液 1 % ,ｐＨ7.2。1 .4 Ｈｐ液体培养基 布氏肉汤血琼脂培养基不加琼脂即为Ｈｐ液体培养基。2 实验方法2 .1 保藏菌株的活化 取 0 .1ｍＬ冻融的Ｈｐ保存菌株置于布氏肉汤血琼脂培养基平板上 ,涂布均匀 ,于 3 6℃微需氧环境 (Ｎ2 85 % ,ＣＯ2 1 0 % ,Ｏ2 5 % )下培养 72ｈ。2 .2 菌悬液的制备 取一环活化的Ｈｐ于 1 0ｍＬ液体培养基中 ,培养 1 2～ 1 8ｈ,制成菌悬液 ,使菌悬液浓度达 1× 1 0 8ＣＦＵ·ｍＬ- 1 。2 .3 中药制剂液的制备 取一定量的黄连 ,加入到液体培养基中 ,制成处理浓度分别为 40 ,5 0和 5 5ｍｇ·ｍＬ- 1 的中药制剂液。其他 4种中药制剂 (枳实、紫草、逍遥汤、黄芪健中汤 )同法处理 ,得到不同种类、不同浓度的中药制剂液。2 .4 杀菌试验 取菌悬液 1ｍＬ分别加入到含不同中药制剂液的试管中 ,同时设不含药对照管。将含药管和不含药对照管同时置于 3 6℃微需氧环境下培养 2 4ｈ。从各管中取材料 ,经适当稀释后涂布于布氏肉汤血琼脂培养基平板上 ,于 3 6℃微需氧环境下培养 72ｈ ,计平板上存活菌落数。不含药对照管在平板上菌落数计为起始菌落数。杀菌率按下式计算 :杀菌率 % =(起始菌数 -存活菌数 ) 起始菌数×1 0 0。结果1 Ｈｐ存活菌数的比较黄连对Ｈｐ的杀菌作用在 40～ 5 0ｍｇ·ｍＬ- 1 范围内存在一临界浓度 ,这一浓度可使Ｈｐ的存活菌数由 1 0 7下降到 1 0 6 ＣＦＵ·ｍＬ- 1 ,使杀菌效果提高。枳实和黄芪健中汤浓度在 5 0～ 5 5ｍｇ·ｍＬ- 1 范围内亦存在一临界浓度 ,这一浓度可提高杀菌作用 ,使Ｈｐ的存活菌数由 1 0 7下降到 1 0 6 ＣＦＵ·ｍＬ- 1 。随着浓度的提高 ,紫草和逍遥汤的杀菌效果也逐渐明显。结果见表 1。表 1 5种中药制剂对Ｈｐ的杀菌作用比较处理浓度 ｍｇ·ｍＬ-1Ｈｐ存活菌数 10 6ＣＦＵ·ｍＬ-1黄连枳实紫草逍遥汤黄芪健中汤对照40 2 4.0 78.0 2 0 0 .0 2 80 .0 60 .0 40 0 .050 1.0 60 .0 10 .0 86.0 46.0 60 0 .0552 .0 1.2 2 .2 1.43 .0 2 0 0 .02 对Ｈｐ杀菌率的比较5种中药制剂中 ,黄连的杀菌效果最好 ,当浓度为 5 0ｍｇ·ｍＬ- 1 时 ,杀菌率达 99.8%。其次是枳实和黄芪健中汤 ,浓度在 5 0ｍｇ·ｍＬ- 1 时 ,杀菌率在90 %以上。 5种中药制剂在不同浓度下的杀菌率结果见表 2。表 2 5种中药制剂对Ｈｐ的杀菌率比较处理浓度 ｍｇ·ｍＬ-1Ｈｐ杀菌率 %黄连枳实紫草逍遥汤黄芪健中汤40 94.0 80 .550 .0 3 0 .0 85.050 99.890 .0 98.3 85.7 92 .35599.0 99.498.999.3 98.5讨论本研究结果显示 ,当 5种中药制剂的处理浓度达到 5 5ｍｇ·ｍＬ- 1 时 ,杀菌率在 98.5 %以上 (Ｈｐ存活菌数下降到 1 0 6 ＣＦＵ·ｍＬ- 1 )。在试验所选浓度范围内 ,单方中以黄连的杀菌效果最好 ,黄连抑菌的有效成分一般认为是小檗碱 ,黄连粗提取物与纯小檗碱的抗菌作用基本上是一致的 ,其杀菌作用机制较为复杂 ,尚未阐明 ,可能是小檗碱抑制细菌的生长与呼吸 ,抑制细菌的葡萄糖及糖代谢中间产物的氧化过程 ,特别是脱氧反应 ,从而杀灭细菌。复方中以黄芪健中汤杀菌效果较佳 ,可能是多种中药协同作用的原因。随着医学的发展 ,Ｈｐ的治疗方法也经历了以下几种发展过程 :单一抗菌药治疗 ;2种药物治疗 ;铋剂三重治疗 ;抗分泌药物与抗菌药联合治疗 (Ｈｐ疫苗 )。单一抗菌药或 2种药物治疗疗效较差。铋剂三重治疗根除率在 90 %左右 ,但其不良反应大 ,服药量大 ,治疗费用昂贵。抗分泌药物与抗菌药联合治疗存在耐受性差的问题 ,未取得令人满意的效果 ,加之我国动物模型的限制 ,Ｈｐ疫苗研究进展缓慢<3,4 > 。近年来我国中医药研究的迅速发展 ,为采用中药来防治Ｈｐ感染提供了一条新途径。本研究结果显示 ,所选用的这 5种中药制剂 ,不论单方或复方对Ｈｐ均有一定杀灭作用。因而为治疗Ｈｐ感染 ,提供了多种可供选择的中药制剂 ,为不同患者治疗Ｈｐ感染提供多种可供选择的治疗方案5种中药制剂杀灭幽门螺杆菌的实验研究@刘波$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@李雪驼$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@徐和利$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@王海岩$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@赵静玫$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@孙艳$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@杨晓明$大连市友谊医院!大连116011
@谷源平$大连市友谊医院!大连116011
@杨玉龙$大连市友谊医院!大连116011中药;;
幽门螺杆菌;;杀菌作用目的 :考察 5种中药制剂对幽门螺杆菌 (Hp)的杀菌作用。 方法 :采用平板涂布法 ,对黄连、枳实、紫草、逍遥汤、黄芪健中汤分别进行了Hp的杀菌试验 ,中药制剂处理浓度分别为 40 ,50和 55mg·mL-1 。结果 :在所选浓度范围内 ,5种中药制剂对Hp均有一定的杀灭作用 ;随着浓度的增加 ,杀菌作用增强。结论 :黄连、枳实和黄芪健中汤具有明显的杀菌作用 ,其中以黄连的杀菌效果较为显著 ,黄连处理浓度为 50mg·mL-1 时 ,杀菌率达 99.8%。<1> TimothyHS ,LisaML ,GaryRA .Developmentofaselectivemedi umforisolationofHelicobacterpylorifromcattleandbeefsam ples
.ApplEnvironMicrobiol,2000,66(2)∶723-727.
<2> 潘占荣.幽门螺杆菌与胃炎.新消化病学杂志,1997,5(1)∶49-51.
<3> 贺茜.幽门螺杆菌的微生态研究现状.微生物学通报,1990,17(4)∶236-237.
<4> 黄洋,陶天申.幽门螺杆菌的研究现状.微生物学通报,1993,20(6)∶368-370.连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@李雪驼$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@徐和利$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@王海岩$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@赵静玫$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@孙艳$中国科学院大连化学物理研究所生物技术部!大连116023
@杨晓明$大连市友谊医院!大连116011
@谷源平$大连市友谊医院!大连116011
@杨玉龙$大连市友谊医院!大连116011 中药;;幽门螺杆菌;;杀菌作用目的 :考察 5种中药制剂对幽门螺杆菌 (Hp)的杀菌作用。 方法 :采用平板涂布法 ,对黄连、枳实、紫草、逍遥汤、黄芪健中汤分别进行了Hp的杀菌试验 ,中药制剂处理浓度分别为 40 ,50和 55mg·mL-1 。结果 :在所选浓度范围内 ,5种中药制剂对Hp均有一定的杀灭作用 ;随着浓度的增加 ,杀菌作用增强。结论 :黄连、枳实和黄芪健中汤具有明显的杀菌作用 ,其中以黄连的杀菌效果较为显著 ,黄连处理浓度为 50mg·mL-1 时 ,杀菌率达 99.8%。<1> TimothyHS ,LisaML ,GaryRA .Developmentofaselectivemedi umforisolationofHelicobacterpylorifromcattleandbeefsam ples.ApplEnvironMicrobiol,2000,66(2)∶723-727.
<2> 潘占荣.幽门螺杆菌与胃炎.新消化病学杂志,1997,5(1)∶49-51.
<3> 贺茜.幽门螺杆菌的微生态研究现状.微
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