黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏、栀子4味中药组成,有泻火解毒的功效,是治疗火热毒盛诸证的重要方剂。因其多以汤剂应用,服用、携带不便,为制第27卷第12期2002年12月 中国中药杂志China J0umal of Chinese Materia MedicaV01.27.№.12 Dec..2002成更为方便口服制剂,有必要对其进行纯化,以除去杂质。本文分别用醇沉、大 孔树脂吸附和吸附澄清剂澄清3种方法对黄连解毒汤的水提取液进行了纯化,并用唧LC法测定了 其中盐酸小檗碱的含量,以盐酸小檗碱含量为指标,对上述3种纯化方法进行了比较,为进一步的制剂学研究打下了基础。1药品、试剂与仪器黄连、黄芩、黄柏、栀子:购于北京市药材公司。盐酸小檗碱对照品(含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号0731—9605)。 乙腈(色谱纯,北京化工厂);甲醇(优级纯,北京化工厂);冰醋酸(分析纯,北京化工厂);磷酸氢二钾(分析纯,北京化工厂);双蒸水:自制。 101果汁澄清剂(上海市徐汇区华逊应用生物化学研究所);D100×3大孔吸附树脂(安徽省固镇县精细化工厂)。 高效液相仪:waters 600泵;486紫外分光检测器;Milenitlm 20 10色谱管理者软件。2提取和纯化2.1提取工艺 分别称取黄连720 g、黄柏480 g、黄芩480 g、栀子720 g,加水煎煮2次,合并煎液,滤过,浓缩至每毫升含1 g生药,离心(2 500 r·min～,20 min),上清液留用。2.2纯化工艺 为全面反映各纯化方法对结果的影响,采用了每种纯化方法各选3个不同纯化水平,每一水平做3份平行试验的试验方法制备样品。具体工艺操作如下。2.2.1醇沉法取上清液450 mL,均分为9份,每份50 mL,相当于50 g生药,加乙醇至醇浓度分别为50％,60％,70％,每一浓度平行各做3份。冷藏过夜,抽滤,滤液浓缩并真空干燥成干浸膏,粉碎后备用.。2.2.2 吸附澄清法 取上清液900 mL,均分为9份,每份1 00mL,相当于1 00g生药,分别离心(2 500 r·min一,20 min)后,倾出上清液,加适量蒸馏水返溶沉淀部分,离心,合并两次离心液,置水浴上加热,加 入5％的101果汁澄清剂溶液,加入量分别为药液体积的30％,40％,50％,每一水平各平行做3份,搅拌15min,溶液放冷后冷藏12 h,离心,取上清液浓缩并真空干燥成干浸膏,粉碎后备用。 ·904·2.2.3大孔树脂吸附法取上清液900 mL,均分为9份,每份100 mL,相当于100 g生药,分别离心(2 500 r·min一,20 min)后倾出上清液,加适量蒸馏水返溶沉淀部分,离心,合并两次离心液,加入适量蒸馏水,混 匀后上树脂柱(生药量:树脂量=2:1)。待药液流完后,加入1倍生药量蒸馏水冲柱,待蒸馏 水走净后,用4倍生药量的不同浓度乙醇洗脱。乙醇浓度分别为50％,60％,70％,每一浓 度各平行做3份。洗脱液回收乙醇,浓缩并真空干燥成干浸膏,粉碎后备用。3盐酸小檗碱的含量测定3.1色谱条件I川m C】8色谱柱(4.6 nlm×250 mm,5 flm,Phe—nomenex);流动相乙腈一0.81％磷酸二氢钾溶液(37:63),流速1.0 mL·min叫;灵敏度1.00 AUFS;检测波长350 nm。 在上述条件下,盐酸小檗碱峰可与其他峰达到基线分离(图1)。5 10A“¨图1 黄连解毒汤对照品、样品及阴性对照HPIr色谱图 A.盐酸小檗碱对照品 B.样品 C.阴性对照 a盐酸小檗碱3.2工作曲线的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品5.0 mg,置50 mI。·容量瓶中,加适量甲醇溶解并加至刻度,摇匀,得到100肛g·mL0的对照溶液,并依 次稀释得到80,50,30,20,15,10,5肚g·mI。一的对照溶液,在E述色谱条 件下分别进样,进样量10"L,每一浓度重复3次,测定峰面积。以盐酸小檗碱进样量(弘g) 对峰面积进行回归处理,结果表明,盐酸小檗碱进样量在0.05～0.80弘g与峰面积呈线性相关,线性方程为y=一13660+3 942 994X,r=0.9999(n=7)。3.3精密度试验 取20肚g·mL一对照溶液连续进样5钳‘,测定峰面积,并计算相对标准偏差,RSD=0.72％(”=5)。3.4样品测定 取().5 g干浸膏粉,精密称定,加入30 mL甲醇回流提取3次,每次2 h,合并提取液,置1 o()mI。容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.2 fzm)滤过后供进样用,进样量10”L。3.5加样回收率试验 称取3份已知含量的干浸膏粉,每份0.5 g,精密称定,精密加入一定量的对照品,其余按样品测定项下方法操作,测定,计算加样回收率,结果见表1。表1干浸膏粉中盐酸小檗碱加样回收率试验 f 注:浸膏中含量均为3.23 n.1g4结果分析 对黄连解毒汤水提取液不同纯化方法处理所得lF膏的出膏率和盐酸小檗碱含量进行了测定,结果见表2。表2 3种纯化方法的出膏率和盐酸小檗碱含量(j±s)注:醇沉法、大钆树脂吸附法,n=9吸附剂澄 清法川=6由表2可知,大孔树脂吸附法出膏率最低,醇沉法次之,吸附澄清法最高。大孔树脂吸附法盐酸小檗碱含量最高。醇沉法次之,吸附澄清法最低。为进一步考察3种纯化方法间是否有显著性差异,对含量测定结果进行了统计学处理。方差分析结果见表3。表3方差分析表 往:F、l l】0s(2,24)=3.4l J 一0 01(2,24)=5.6l 由表6可知,各方法间有极显著性差异。 为考察3种纯化方法两两间是否存在显著性差异,对3种方法盐酸小檗碱的平均含量差值进行了两两 间多重比较((,检验),结果表明,各纯化方法间均存在极显著差异,盐酸小檗碱含量以大孑L树脂吸附法最高。醇沉法次之,吸附澄清法最低。5小结与讨论综合考虑,以大孔树脂吸附法盐酸小檗碱含量最高,而出膏率明显低于另两种方法;醇沉法次之;吸 附澄清法出膏率最高,而盐酸小檗碱含量最低。由此可见,对于黄连解毒汤,大孔树脂吸附法既可降低出膏率,又可很好地保留有效成分,不失为一个良好的纯化方法。吸附澄清法出膏率较高,可能是由于澄清药液中残留有较多的澄清剂,该方法所得药液澄清稳定,适于液体制剂的制备,有进一步研究的价值。 黄连解毒汤中盐酸小檗碱的含量测定方法有薄层扫描i川、比色法<0>等,本文采用高效液相色谱 法,方法简便、稳定、可靠。不同纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响@聂其霞$中国中医研究院中药研究所!北京100700
@赵小妹$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@张保献$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@臧琛$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@冯青然$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@王元瑜$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@马振山$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@仝燕$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@王琳$中国中医研究院中药研究所!北京 100700黄连解毒汤;;盐酸小檗碱;;高效液相色谱法;;醇沉法;;大孔树脂吸附法;;吸 附澄清法目的:比较了3种纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响,以优选出黄连解毒汤 的水提取液的最佳纯化方法。方法:对黄连解毒汤的水提取液分别用醇沉、大孔树脂吸附和吸附澄 清剂澄清3种方法纯化,并用HPLC法测定了所得提取物中盐酸小檗碱的含量,以此为指标对3 种纯化方法进行了比较研究。结果:大孔树脂吸附法出膏率最低,醇沉法次之,吸附澄清法最高; 盐酸小檗碱含量以大孔树脂吸附法最高,醇沉法次之,吸附澄清法最低。结论:大孔树脂吸附法为黄连解毒汤水提取液的最佳纯化方法。<1>郭乃燕,刘小平,潘旭初.黄连解毒汤(合剂)的研究.中成药,1990,12(7) :17．
<2> 李锡岩.谈谈几种中草药针剂质量及疗效稳定性问题的看法.中药通报,1981,3(6) :1．国家中医药管理局科研基金项目(95A3311)吻宸ㄗ畹汀?小结与讨论 综合考虑,以大孔树脂吸附法盐酸小檗碱含量最高,而出膏率明显低于另两种方法;醇沉法次之;吸 附澄清法出膏率最高,而盐酸小檗碱含量最低。由此可见,对于黄连解毒汤,大孔树脂吸附法既可降低出膏率,又可很好地保留有效成分,不失为一个良好的纯化方法。吸附澄清法出膏率较高,可能是由于澄清药液中残留有较多的澄清剂,该方法所得药液澄清稳定,适于液体制剂的制备,有进一步研究的价值。 黄连解毒汤中盐酸小檗碱的含量测定方法有薄层扫描i川、比色法<0>等,本文采用高效液相色谱 法,方法简便、稳定、可靠。不同纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响@聂其霞$中国中医研究院中药研究所!北京100700
@赵小妹$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@张保献$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@臧琛$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@冯青然$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@王元瑜$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@马振山$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@仝燕$中国中医研究院中药研究所!北京 100700
@王琳$中国中医研究院中药研究所!北京 100700黄连解毒汤;;盐酸小檗碱;;高效液相色谱法;;醇沉法;;大孔树脂吸附法;;吸附澄清法目的:比较了3种纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响,以优选出黄连解
More abstracts about the 不同纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响