鹿衔草为鹿蹄草科植物鹿蹄草或普通鹿蹄草的干燥全草。具有祛风湿、强筋骨、止血的功效 ,用于治疗风湿痹痛、腰膝无力 ,久咳劳嗽等病<1> 。鹿蹄草科鹿蹄草属约有 30余种 ,我国有 2 7个种 ,在 2 0多个省都有分布 ,资源丰富。化学成分研究结果表明 :鹿衔草中含有金丝桃苷 ,2″ Ｏ 没食子酰基金丝桃苷、高熊果酚苷、肾叶鹿蹄草苷和 6′ Ｏ 没食子酰基高熊果酚苷等<2 > 。金丝桃苷的含量测定方法 ,文献报道的多为高效液相色谱法<3> ,也有采用薄层 紫外分光光度法<4 > 和薄层分离后库伦滴定法<5> 的。不同种鹿衔草中金丝桃苷的含量测定未见报道 ,为了研究不同种鹿衔草中金丝桃苷含量差异 ,进一步开发利用鹿衔草资源 ,我们采用反相高效液相色谱法对陕西产 3个种的鹿蹄草ＰｙｒｏｌａｃａｌｌｉａｎｔｈａＨ .Ａｎｄｒｅｓ、普通鹿蹄草Ｐ .ｄｅｃｏｒａｔａＨ .Ａｎｄｒｅｓ和紫背鹿蹄草Ｐ .ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅａＦｒａｎｃｈ .中的金丝桃苷进行了含量测定。结果表明 ,该测定方法准确 ,灵敏 ,重现性好。1 实验材料Ｈｉ Ｔｅｃｈ 4 0 0 0高效液相色谱仪 ;ＵＶＨｉＴｅｃｈ紫外检测器 ;ＵＶ 2 6 0型紫外分光光度计 (日本岛津 ) ;甲醇为色谱纯 ;其他试剂均为分析纯 ;金丝桃苷(ｈｙｐｅｒｉｎ)对照品 ,从鹿衔草中提得 ,经ＴＬＣ ,ＨＰＬＣ鉴定并与已知对照品一致<2 > ,纯度为 98.6 3%。鹿蹄草Ｐ .ｃａｌｌｉａｎｔｈａ(采自陕西太白县太白山 )、普通鹿蹄草Ｐ .ｄｅｃｏｒａｔａ(采自陕西留坝县张良庙 )和紫背鹿蹄草Ｐ .ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅａ(采自陕西洋县华阳镇 ) ,药材均在 3月采集并经西安交通大学药学院徐文友教授鉴定。2 色谱条件及分离结果色谱条件 :ＫＲＯＭＡＳＩＬＣ18(4.6ｍｍ× 2 5 0ｍｍ ,10 μｍ ) ;
流动相 :甲醇 水 (40∶6 0 ) ,流速 :0 .8ｍＬ·ｍｉｎ- 1,检测波长 :35 8ｎｍ。3 分析测定3.1 对照品溶液的制备 精密称取金丝桃苷对照品 ,用少量甲醇溶解后 ,用流动相稀释至每 1ｍＬ含0 .12 2 4ｍｇ的溶液作为对照品溶液。3.2 供试品溶液的制备 取鹿蹄草、普通鹿蹄草和紫背鹿蹄草干燥全草粉末各 0 .8～ 1ｇ ,精密称定 ,用醋酸乙酯索氏提取 5ｈ ,提取液挥去溶剂 ,残渣用少量甲醇溶解并用流动相定容至 10ｍＬ量瓶中 ,摇匀 ,即得供试品溶液。3.3 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1.0 ,3.0 ,5 .0 ,7.5 ,10ｍＬ ,用流动相稀释并定容至10ｍＬ ,各进样 10 μＬ ,按上述色谱条件分离测定 ,以对照品的量 (μｇ)为横坐标 ,金丝桃苷的峰面积积分值为纵坐标 ,得回归方程 ,Ｙ =- 5 6 2 0 .75 6 +131732 6 .0 5 1Ｘ ,ｒ =0 .9995 ,金丝桃苷在 0 .12 2 4～1.2 2 4 μｇ内线性关系良好。3.4 精密度 精密吸取供试品溶液 10 μＬ ,重复进样 5次 ,测定金丝桃苷平均峰面积积分值 10 2 6 2 0 7,其ＲＳＤ为 1.0 %。3.5 稳定性试验 在室温条件下 ,将普通鹿蹄草 1份供试品溶液在 3ｄ内每隔一定时间测定 1次 ,共测定 5次 ,结果金丝桃苷平均峰面积积分值为76 70 2 0 ,其ＲＳＤ =1.7% (ｎ =5 )。表明溶液在 3ｄ内基本稳定。3.6 加样回收率试验 取已知含量的普通鹿蹄草样品 5份 ,每份约 0 .5 ｇ ,精密称定 ,准确加入金丝桃苷对照品溶液 2 .5ｍＬ ,按“3.2”方法制备供试品溶液 ,分别进样 10 μＬ ,分离测定 ,外标法计算含量 ,测定结果见表 1。表 1 金丝桃苷加样回收率试验取样量/ｇ样品含量/ｍｇ加入量/ｍｇ测得量/ｍｇ回收率/%ｘ/%ＲＳＤ/%0 .5 0 840 .2 9790 .3 0 60 0 .60 2 899.7 0 .5 10 2 0 .2 9890 .3 0 60 0 .5 98497.9 0 .5 0 2 0 0 .2 9410 .3 0 60 0 .5 963 98.898.61.10 .5 0 690 .2 970 0 .3 0 60 0 .5 940 97.1 0 .5 1190 .2 9990 .3 0 60 0 .60 43 99.5 3.7 样品测定 分别取鹿蹄草、普通鹿蹄草和紫背鹿蹄草 0 .8～ 1.0ｇ ,按“3.2”方法制备供试品溶液 ,分别进样 10 μＬ ,分离测定 ,外标法计算含量 ,结果见表 2。表 2 不同种鹿衔草中金丝桃苷含量测定ｎ =5样品金丝桃苷含量 /%ＲＳＤ/%鹿蹄草 0 .0 17 1.3普通鹿蹄草 0 .0 5 90 .5紫背鹿蹄草 0 .0 90 1.04 讨论4 .1 采用ＨＰＬＣ法 ,一次进样分离测定鹿蹄草中金丝桃苷的含量 ,方法简便、快速 ,结果可靠 ,从测定结果看 ,紫背鹿蹄草Ｐ .ａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅａ中金丝桃苷含量最高为 0 .0 90 % ,普通鹿蹄草Ｐ .ｄｅｃｏｒａｔａ次之 ,含量为 0 .0 5 9% ,鹿蹄草Ｐ .ｃａｌｌｉａｎｔｈａ含量最低为 0 .0 17%。4 .2 金丝桃苷属黄酮苷类 ,在甲醇、乙醇、及醋酸乙酯中均易溶解 ,用醋酸乙酯提取的供试品溶液 ,色谱分离效果较好 ,干扰少 ,故选择醋酸乙酯作为提取溶剂。4 .3 提取条件的选择 ,分别采用索氏提取 ,回流提取及浸泡过夜提取方式对普通鹿蹄草进行提取、测定 ,结果表明 :索氏提取效果最好 ,故选择索氏提取方式。提取时间分别采用索氏提取 4 ,5 ,6ｈ ,测定结果表明 :提取 5ｈ已提取完全 ,故采用索氏提取 5ｈ。4 .4 流动相的选择 ,考虑到金丝桃苷的柱效和分离情况 ,选择甲醇 水 (40∶6 0 )为流动相比用甲醇 3%醋酸水溶液 (43∶5 7)为流动相得到的分离结果满意 ,故选择甲醇 水 (40∶6 0 )为流动相。4 .5 测定波长的选择 ,取对照品溶液 ,用流动相稀释后用ＵＶ 2 6 0型紫外分光光度计在紫外区扫描 ,测得金丝桃苷最大吸收波长为 2 5 6ｎｍ和 35 8ｎｍ ,本试验选用 35 8ｎｍ为测定波长。HPLC测定不同种鹿衔草中金丝桃苷的含量@石娟$西安交通大学药学院!陕西西安710061
@刘瑞$西安交通大学药学院!陕西西安710061
@宋晓涛$西安交通大学药学院!陕西西安710061
@王军宪$西安交通大学药学院!陕西西安710061<1> 中国药典.一部.2000.265.
<2> 王军宪,陈新民,李 宏,等.鹿衔草化学成分的研究(第1报).天然产物研究与开发,1991,3(3):1.
<3> 杨书斌,谢鸿霞,孙敬勇,等.HPLC法测定山楂中金丝桃甙的含量.中成药.1999,21(9):475.
<4> 李星海,王军宪,徐文友.秦岭三种金丝桃属植物药中金丝桃甙的含量测定.西北药学杂志.1994,9(1):18.
<5> 徐礼,刘爱茹.罗布麻中金丝桃甙含量测定.药物分析杂志,1996,6(2):81.醋酸水溶液 (43∶5 7)为流动相得到的分离结果满意 ,故选择甲醇 水 (40∶6 0 )为流动相。4 .5 测定波长的选择 ,取对照品溶液 ,用流动相稀释后用ＵＶ 2 6 0型紫外分光光度计在紫外区扫描 ,测得金丝桃苷最大吸收波长为 2 5 6ｎｍ和 35 8ｎｍ ,本试验选用 35 8ｎｍ为测定波长。HPLC测定不同种鹿衔草中金丝桃苷的含量@石娟$西安交通大学药学院!陕西西安710061
@刘瑞$西安交通大学药学院!陕西西安710061
@宋晓涛$西安交通大学药学院!陕西西安710061
@王军宪$西安交通大学药学院!陕西西安710061<1> 中国药典.一部.2000.265.
<2> 王军宪,陈新民,李 宏,等.鹿衔草化学成分的研究(第1报).天然产物研究与开发,1991,3(3):1.
<3> 杨书斌,谢鸿霞,孙敬勇,等.HPLC法测定山楂中金丝桃甙的含量.中成药.1999,21(9):475.
<4> 李星海,王军宪,徐文友.秦岭三种金丝桃属植物药中金丝桃甙的含量测定.西北药学杂志.1994,9(1):18.
<5> 徐礼,刘爱茹.罗布麻中金丝桃甙含量测定.药物分析杂志,1996,6(2):81.
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