丹参Ｓａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｉｈｉｚａ具有活血化瘀、行气止痛的功效。复方丹参制剂是我国治疗冠心病、心绞痛的常用中成药 ,由丹参、三七、冰片三味药组成。药理实验表明丹参脂溶性成分—丹参酮类具有抗菌消炎、抗肿瘤功效 ,
水溶性成分—丹酚酸类可有效抑制大鼠脑、肝、肾的脂质过氧化 ,原儿茶醛能显著增加冠脉流量。目前复方丹参制剂剂型多样 ,2 0 0 0年版中国药典收载有复方丹参片和复方丹参滴丸 ,市售商品多种 ,质量不一。以往文献已对丹参制剂的质量控制进行了探讨 ,一般仅单独测定丹参中的脂溶性成分或水溶性成分 ,本文运用高效液相色谱 梯度洗脱法一次性测定复方丹参制剂中丹参 9种有效成分含量 ,结果准确 ,且前处理简便 ,可作为复方丹参制剂品质评价标准。1 实验部分1 .1 仪器与试药日本岛津ＬＣ 1 0ＡＤ高效液相色谱仪 ;日本岛津ＳＰＴ 1 0Ａ检测器 ;杭州英谱ＨＳ4.0 +色谱工作站。复方丹参制剂 (ａ) (ｇ)分别为复方丹参片ａ ｇ、(ｈ)复方丹参含片、(ｉ)复方丹参滴丸、(ｊ)丹参片均为市售药品。对照品丹参素、原儿 茶酸、
原儿茶醛、丹酚酸Ｂ、丹参酸甲酯、二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡＡ由中药分析教研室提供。乙腈为色谱纯,水为纯净水 ,其余试剂均为分析纯。1 .2 色谱条件色谱柱为日本岛津Ｓｈｉｍ ｐａｃｋＣＬＣ ＯＤＳ柱 ( 1 5 0ｍｍ× 4.6ｍｍ ,5 μｍ) ;梯度洗脱流动相 (Ａ) 0 5 %甲酸水溶液、(Ｂ)乙腈 ,洗脱程序如下 :0～ 1 5ｍｉｎ ,0 %Ｂ～ 40 %Ｂ ;1 5～ 40ｍｉｎ ,40 %Ｂ～ 65 %Ｂ ;40～ 5 5ｍｉｎ ,65 %Ｂ ;5 5ｍｉｎ。检测波长 :0～ 2 5ｍｉｎ为 2 81ｎｍ ,2 5～ 5 5ｍｉｎ为 2 5 4ｎｍ ;柱温 :室温 ;流速 :0 .8ｍｌ/ｍｉｎ。分离结果见图 1。Ｆｉｇ 1 ＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｃｏｍｐｌｅｘｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｉ ｈｉｚａＡ ｓｔａｎｄａｒｄ ;Ｂ ｓａｍｐｌｅ ;1 ｄａｎｓｈｅｎｓｕ ;2 ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃａｃｉｄ ;3 ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕａｌｄｅｈｙｄｅ ;4 ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢ ;5 ｍｅｔｈｙｌｔａｎｓｈｉｎｏｎａｔｅ ;6 ｄｉｈｙｄｒｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ ;7 ｃｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ ;8 ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅠ ;9 ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ2 方法与结果2 .1 对照品溶液的制备精密称取各对照品 ,以甲醇配制成丹参素( 1 32 .5 μｇ/ｍｌ)、原儿茶酸 ( 5 7.5 μｇ/ｍｌ)、原儿茶醛( 5 5 .5 μｇ/ｍｌ)、丹酚酸Ｂ( 2 82 μｇ/ｍｌ)、丹参酸甲酯( 5 5 .5 μｇ/ｍｌ)、二氢丹参酮 ( 1 35 μｇ/ｍｌ)、隐丹参酮( 90 .75 μｇ/ｍｌ)、丹参酮Ⅰ ( 1 1 3.75 μｇ/ｍｌ)、丹参酮ⅡＡ( 1 86μｇ/ｍｌ)的混合对照品溶液。2 .2 供试品溶液的制备取片剂 1 0片 (丸剂 2 0粒 ) ,除去包衣 ,精密称定 ,求其平均片 (丸 )重 ,粉碎。精密称取样品 0 .2ｇ ,置 5ｍｌ容量瓶中 ,以甲醇 5ｍｌ超声提取 1 5ｍｉｎ ,放置至室温 ,补足所失溶剂 ,取上清液过微孔滤膜 ,即得供试品溶液。2 .3 标准曲线的制作分别精密吸取混合对照品溶液 0 .1 ,0 .2 ,0 4,0 .6,0 .8,1ｍｌ,置 1ｍｌ量瓶中 ,定容至刻度。进样2 0 μｌ,测定峰面积。以峰面积为纵坐标 ,对照品浓度 ( μｇ/ｍｌ)为横坐标 ,绘制标准曲线。结果见表 1。 Ｔａｂ 1.Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｓａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅ ｎｔｓｆｏｒｃｏｍｐｌｅｘｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａＣｏｍｐｏｕｎｄＲｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔＴｅｓｔｒａｎｇｅ (μｇ/ｍｌ)ＤａｎｓｈｅｎｓｕＹ =2 13 8.1Ｘ + 2 860 .7 0 .999113 2 .5 0 0 1.3 2 5ＰｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃａｃｉｄＹ =42 78.2Ｘ + 175 2 .5 0 .99945 7.5 0 0 0 .5 75ＰｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕａｌｄｅｈｙｄｅＹ =13 2 79Ｘ + 65 97.5 0 .99945 5 .5 0 0 0 .5 5 5ＳａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢＹ =2 5 99.4Ｘ + 40 45 .10 .99942 82 .0 0 0 2 .82 0ＭｅｔｈｙｌｔａｎｓｈｉｎｏｎａｔｅＹ =72 19.8Ｘ + 3 0 190 .99915 5 .5 0 0 0 .5 5 5ＤｉｈｙｄｒｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅＹ =14 80 3Ｘ + 81.2 75 0 .999813 5 .0 0 0 1.3 5 0ＣｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅＹ =10 14 1Ｘ + 5 2 13 .40 .9995 90 .75 0 0 .90 8ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅠＹ =13 3 48Ｘ + 3 92 6.2 0 .9999113 .75 0 1.13 8ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡＹ =10 681Ｘ + 183 10 0 .9995 186.0 0 0 1.8602 .4 仪器精密度试验精密吸取供试品溶液 2 0 μｌ,重复进样 5次 ,结果各化合物的ＲＳＤ均小于 5 % ,表明其精密度良好。2 .5 重复性试验取同一样品 5份 ,分别按 2 .2、2 .6项下平行操作 ,结果各化合物的ＲＳＤ分别为 3.5 8% ,2 .93% ,2 .45 % ,3.75 % ,2 .92 % ,2 .89% ,2 .79% ,4.5 4 % ,3.84% ,表明其重现性良好。2 .6 回收率试验取已知含量的样品 5份 ,精密称定 0 .1ｇ ,加入一定量的对照品溶液 ,按样品制备方法及测试条件测定。结果各化合物的回收率分别为 1 0 2 .31 % ,1 0 1 .43% ,95 .62 % ,1 0 2 .5 8% ,1 0 4 .2 2 % ,1 0 1 89% ,99.74% ,96.64% ,1 0 2 .5 4 % ,ＲＳＤ分别为 3 5 2 % ,2 .84% ,2 .96% ,3.34% ,1 .68% ,3 0 2 % ,1 42 % ,2 .1 3% ,2 .89%。2 .7 样品测定分别精密吸取供试品溶液 2 0 μｌ,注入高效液相色谱仪 ,测定峰面积 ,计算含量。结果见表 2。Ｔａｂ 2 .Ｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆａｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｃｏｍｐｌｅｘｐｒｅｓｃｒ ｉｐｔｉｏｎｏｆＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ(μｇ/ｔａｂｌｅｔｏｒｐｉｌｌ)ＤａｎｓｈｅｎｓｕＰｒｏｔｏｃａｔｅ ｃｈｕｉｃａｃｉｄＰｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕａｌ ｄｅｈｙｄｅＳａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢＭｅｔｈｙｌｔａｎｓｈｉ ｎｏｎａｔｅＤｉｈｙｄｒｏ ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅＣｒｙｐｔｏｔａｎｓｈｉ ｎｏｎｅＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅠＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａ 3 63 2 2 2 86983 3 10 4172 3 3 8ｂ 5 982 0 40 2 5 883 7 2 110 185 179ｃ 7612 13 1198ｎｄ 83 42 6188412ｄ 2 742 7 41617610 64 492 3 3ｅ 40 5 12 3 2 0 3 1863 3 40 3 15 471ｆ 12 99 85 2 15 962 0 115 40 0 5 3 5 65 5ｇ 2 2 85 17 2 0 9118417 3 0 2 1812 98ｈ 2 615ｔｒ 3 1815 7ｔｒ 3 2 2 2ｔｒｉ 71ｎｄ 2 43 6ｔｒ 1ｔｒ 1ｔｒｊ 5 90ｔｒ 2 0 3 70 2 16681963 0 13 5 3ｎｄ :ｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄ ,ｔｒ :ｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｂｅｙｏｎｄｔｈｅｔｅｓｔｒａｎｇｅ3 讨 论1 )在样品预处理过程中 ,比较过以甲醇、75 %乙醇、5 0 %乙醇、5 0 %甲醇为提取溶剂进行提取 ,只有甲醇能同时提取出脂溶性、水溶性成分。且前处理简便 ,能最大程度减少成分在提取过程中发生变化。2 )本试验采用梯度洗脱、切换检测波长等方法 ,一次性检测复方丹参制剂中脂溶、水溶性成分 ,增加了分析信息量 ,缩短了分析时间 ,提高了检测灵敏度 ,为制定此类制剂的指纹图谱进行了有益的探索。致 谢 :本校生药研究室徐德然老师在含量测定时提供仪器使用与分析方法学指导HPLC法测定复方丹参制剂中丹参有效成分的含量@汪红$中国药科大学中药分析教研室!南京210038
@王强$中国药科大学中药分析教研室!南京210038HPLC;;复方丹参制剂;;有效成分目的 采用高效液相色谱 梯度洗脱法一次测定复方丹参制剂中丹参有效成分的含量。方法 以乙腈、0 .5 %的甲酸水溶液作为梯度洗脱流动相 ,流速为 0 .8ml/min。结果 回收率为 95 .6 2 % 10 4 .2 2 % ,RSD为1.4 2 % 3.5 2 %。结论 此法可作为复方丹参制剂质控的标准。<1> 孙 丕(SunP),何丽一(HeLY)丹参制剂中有效成分的RP HPLC测定法
药物分析杂志(ChinJPharmAnal),1995,15(增刊):218
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