复方鳖甲软肝片由鳖甲、赤芍、三七、紫河车、冬虫夏草、连翘等 1 1味中药组成 ,具有软坚散结、化瘀解毒、益气养血之功效 ,适用于慢性乙型肝炎肝纤维化及早期肝硬化并具中医辨证瘀血阻络、气阴亏虚、热毒未尽证型者<1> 。方中鳖甲、赤芍、三七、紫河车、冬虫夏草由于是以原粉入药 ,故对其所有中药均进行了显微特征鉴别 ,而其余 6味药材由于是以包括挥发油在内的水提物入药 ,参照有关方法<2 > ,对连翘等药材进行了薄层色谱鉴别 ,方法简便、灵敏、重现性好 ,可用作本品的质量控制。1 仪器与试药ＸＳＺ Ｈ生物显微镜(重庆光学仪器厂 ) ;ＯＬＹＭ ＰＵＳＢＨ 2显微描绘器 (日本 ) ;冬虫夏草对照药材、赤芍对照药材、三七对照药材、当归对照药材、连翘苷、
黄芪甲苷、芍药苷 (中国药品生物制品检定所 ) ;
复方鳖甲软肝片(解放军三○二医院 ) ;硅胶Ｇ(青岛海洋化工厂) ;其余试剂均为分析纯。2 显微鉴别取本品 1 0片 ,研细 ,取粉末少许 ,加水合氯醛试液适量浸泡约 2 4ｈ ,透化装片 ,置显微镜下观察 :不规则碎块淡灰黄色 ,表面有裂隙或细纹理 (鳖甲 )。草酸钙簇晶直径 1 8～ 3 2 μｍ ,存在于薄壁细胞中 ,常排列成行 ,或一个细胞中含有数个族晶 (赤芍 )。树脂道碎片含黄色分泌物 (三七 )。膜状物几无色 ,类方形或不规则形 (紫河车)。多出分支状菌丝或散在菌丝无色 ,体壁有刚毛 (冬虫夏草 )。见图 1。3
薄层色谱鉴别3 .1 冬虫夏草薄层色谱鉴别取本品 1 0片 ,研细 ,加乙醚 3 0ｍＬ超声处理1 0ｍｉｎ ,滤过 ,滤液挥干 ,残渣加甲醇 1ｍＬ使溶解 ,作为供试品溶液。另取冬虫夏草对照药材 1 ｇ,同法制成对照药材溶液。按处方比例称取除去冬虫夏草的其它药材适量 ,依照复方鳖甲软肝片的制备工艺和Ｆｉｇ.1 Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ ｔｉｓｏｆＦｕｆａｎｇＢｉｅｊｉａＲｕａｎｇａｎＴａｂｌｅｔｓｐｏｗｄｅｒ1 ＢｏｎｅｔｉｓｓｕｅｃｈｉｐｓｉｎＣａｒａｐａｘＴｒｉｏｎｙｃｉｓ 2 ＣｌｕｓｔｅｒｃｒｙｓｔａｌｉｎＲａｄｉｘＰａｅｏｎｉａｅＲｕｂｒａ 3 ＲｅｓｉｎｃａｎａｌｉｎＲａｄｉｘＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ 4 ＥｐｉｔｈｅｌｉａｌｔｉｓｓｕｅｃｈｉｐｓｉｎＰｌａｃｅｎｔａＨｏｍｉｎｉｓ 5 ＨｙｐｈａｅａｎｄｐａｒｉｅｔｅｓｉｎＣｏｒｄｙｃｅｐｓ上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法 (中国药典 2 0 0 0年版一部附录 3 7页 )试验 ,吸取上述 3种溶液各 5 μＬ ,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上 ,以环己烷 乙酸乙酯 (8∶2 )为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光灯 (3 65ｎｍ)下检视。供试品色谱中 ,在与对照药材色谱相应的位置上 ,显相同颜色的荧光斑点。见图 2。3 .2 连翘薄层色谱鉴别取本品 2 0片 ,研细 ,加甲醇 5 0ｍＬ ,加热回流1ｈ ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加 0 .1ｍｏｌ·Ｌ-1氢氧化钠溶液 2 0ｍＬ使溶解 ,转移至分液漏斗中 ,加入用0 .1ｍｏｌ·Ｌ-1氢氧化钠溶液饱和的正丁醇 40ｍＬ振摇提取 ,分取正丁醇液 ,蒸干 ,残渣加甲醇 1ｍＬ使溶解 ,作为供试品溶液。另取连翘苷对照品 ,加甲醇制成每毫升含 1ｍｇ的溶液 ,作为对照品溶液。按处方比例称取除去连翘的其它药材适量 ,依照复方鳖甲软肝片的制备工艺和上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法 (中国药典 2 0 0 0年版一部附录 3 7页 )试验 ,吸取上述 3种溶液各5 μＬ ,分别点于同一用 0 .4%氢氧化钠溶液制备的硅胶Ｇ薄层板上 ,以乙酸乙酯 甲醇 甲酸 水 (2 0∶6∶1∶4)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 1 0 %硫酸乙醇溶液 ,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,显相同颜色的斑点。见图 3。Ｆｉｇ .2 ＴｈｅＴＬＣｏｆＣｏｒｄｙｃｅｐｓ1 Ｃｏｎｔｒａｓｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｈｅｒｂ :Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ 2～ 4 Ｓａｍｐｌｅ :ＣｏｍｐｏｕｎｄＢｉｅｊｉａＲｕａｎｇａｎＴａｂｌｅｔｓ 5 ＮｅｇａｔｉｖｅｓａｍｐｌｅＦｉｇ .3 ＴｈｅＴＬＣｏｆＦｒｕｃｔｕｓＦｏｒｓｙｔｈｉａｅ1 Ｃｏｎｔｒａｓｔｄｒｕｇ :Ｐｈｉｌｌｙｒｉｎ 2～ 4 Ｓａｍｐｌｅ :ＣｏｍｐｏｕｎｄＢｉｅｊｉａＲｕａｎ ｇａｎＴａｂｌｅｔｓ 5 Ｎｅｇａｔｉｖｅｓａｍｐｌｅ3 .3 三七薄层色谱鉴别取三七对照药材 1ｇ,加甲醇 2 0ｍＬ ,加热回流1ｈ时 ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加 0 .1ｍｏｌ·Ｌ-1氢氧化钠溶液 2 0ｍＬ使溶解 ,转移至分液漏斗中 ,加入用0 .1ｍｏｌ·Ｌ-1氢氧化钠溶液饱和的正丁醇 40ｍＬ振摇提取 ,分取正丁醇液 ,蒸干 ,残渣加甲醇 1ｍＬ使溶解 ,作为对照药材溶液。按处方比例称取除去三七的其它药材适量 ,依照复方鳖甲软肝片的制备工艺和上述鉴别 3 .2项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法 (中国药典 2 0 0 0年版一部附录 3 7页 )试验 ,吸取鉴别 3 .2项下供试品溶液、上述对照药材溶液及阴性对照品溶液各 5 μＬ ,分别点于同一含 0 .3 %羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶Ｇ薄层板上 ,以氯仿 甲醇 水 (65∶3 5∶1 0 ) 1 0°Ｃ以下放置的下层溶液为展开剂 ,于温度为 5 1 0°Ｃ(层析缸预平衡 1 5ｍｉｎ)条件下展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 1 0 %硫酸乙醇溶液 ,在 1 0 5°Ｃ烘约 5ｍｉｎ ,分别置日光及紫外光灯 (3 65ｎｍ)下检视。供试品色谱中 ,在与对照药材色谱相应的位置上 ,分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。见图 4、图 5。Ｆｉｇ.4 ＴｈｅＴＬＣｏｆＲａｄｉｘＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ1 Ｃｏｎｔｒａｓｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｈｅｒｂ :Ｒａｄｉｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ 2～ 4 Ｓａｍｐｌｅ :ＣｏｍｐｏｕｎｄＢｉｅｊｉａＲｕａｎｇａｎＴａｂｌｅｔｓ 5 ＮｅｇａｔｉｖｅｓａｍｐｌｅＦｉｇ .5 ＴｈｅＴＬＣｏｆＲａｄｉｘＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ(365ｎｍ)1 Ｃｏｎｔｒａｓｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｈｅｒｂ :Ｒａｄｉｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ 2～ 4 Ｓａｍｐｌｅ :ＣｏｍｐｏｕｎｄＢｉｅｊｉａＲｕａｎｇａｎＴａｂｌｅｔｓ 5 Ｎｅｇａｔｉｖｅｓａｍｐｌｅ4 讨论4.1 用显微鉴别的方法可以将复方鳖甲软肝片中鳖甲、赤芍、三七、紫河车及冬虫夏草 5味中药检出 ,此方法专属性强且简便易行 ,可用于本品的定性分析。4.2 成药的粉末显微鉴别通常比单味药材的粉末显微鉴别更复杂 ,组分之间存在相互影响而使部分特征在显微镜下难以观察 ,因此 ,显微鉴别往往只取最显著且重现性最好的那部分特征为其显微特征。对于三七 ,由于树脂道碎片在显微镜下易见 ,且含黄色分泌物 ,故以此为特征而收入正文 ,关于其所含草酸钙簇晶 ,由于其棱角钝且量少 ,故未收入正文。对于赤芍 ,由于草酸钙簇晶甚多 ,在显微镜下可在薄壁细胞中观察到 ,且常数个或数 1 0个纵向排列成行 ,故收入正文4 .3 用薄层色谱鉴别的方法可以将复方鳖甲软肝片中冬虫夏草、连翘及三七 3味中药检出 ,均采用各自的阴性对照品和相应有效成分进行对照试验。试验结果表明 ,层析分离清晰 ,斑点集中 ,空白无干扰 ,重现性好 ,可进一步控制本品的质量。4.4 对方中其余药味如当归及其阿魏酸、黄芪中的黄芪甲苷等亦进行了薄层色谱研究 ,但终因空白有干扰 ,尚待进一步研究分离条件 ,故未收入正文复方鳖甲软肝片的鉴别研究@易毛$解放军三○二医院药学部!北京100039
@聂凌云$解放军药品仪器检验所!北京100071
@刘云$解放军药品仪器检验所!北京100071
@贺承山$解放军三○二医院药学部!北京100039复方鳖甲软肝片;;显微鉴别;;薄层色谱鉴别目的 :建立复方鳖甲软肝片的鉴别方法。方法 :利用显微鉴别和薄层色谱鉴别。结果 :通过显微鉴别可鉴别出复方鳖甲软肝片中鳖甲、赤芍、三七、紫河车及冬虫夏草 5味药材 ;通过薄层色谱鉴别可检测出其中冬虫夏草、连翘、三七 3味药材。结论 :方法简便、快速、重现性好 ,可用于复方鳖甲软肝片的质量控制。1> 易 毛,韩 晋.复方鳖甲软肝片
.中国新药杂志,1999,8(9):631.
<2> 王保 .中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社,1994.3 5∶1 0 ) 1 0°Ｃ以下放置的下层溶液为展开剂 ,于温度为 5 1 0°Ｃ(层析缸预平衡 1 5ｍｉｎ)条件下展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 1 0 %硫酸乙醇溶液 ,在 1 0 5°Ｃ烘约 5ｍｉｎ ,分别置日光及紫外光灯 (3 65ｎｍ)下检视。供试品色谱中 ,在与对照药材色谱相应的位置上 ,分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。见图 4、图 5。Ｆｉｇ.4 ＴｈｅＴＬＣｏｆＲａｄｉｘＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ1 Ｃｏｎｔｒａｓｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｈｅｒｂ :Ｒａｄｉｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ 2～ 4 Ｓａｍｐｌｅ :ＣｏｍｐｏｕｎｄＢｉｅｊｉａＲｕａｎｇａｎＴａｂｌｅｔｓ 5 ＮｅｇａｔｉｖｅｓａｍｐｌｅＦｉｇ .5 ＴｈｅＴＬＣｏｆＲａｄｉｘＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ(365ｎｍ)1 Ｃｏｎｔｒａｓｔｍｅｄｉｃｉｎａｌｈｅｒｂ :Ｒａｄｉｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ 2～ 4 Ｓａｍｐｌｅ :ＣｏｍｐｏｕｎｄＢｉｅｊｉａＲｕａｎｇａｎＴａｂ
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