手性药物对映体的分离分析在药物质量控制、对映体的生物活性测定和药理作用研究等方面有非常重 要的意义。而毛细管电泳分离手性物质具有分离效率高、分析时间短、手性分离剂用量少等特点, 巳成为分析化学领域中的研究热点仁‘3。环糊精及其衍生物是毛细管电泳手性分离中最常用的手 性添加剂。当环糊精分子上取代了l个轻丙基后,其溶解度大大提高,有利于加大手性分离剂的浓度来改善分离。罗格列酮钠为胰岛素增敏剂,用来治疗11型糖尿病忆2‘、分子式为c,、H,SN303sNa 。它是一种外消旋体,含有2种异构体。目前未发现有文献报道对22(2),20()2罗格列 酮钠进行手性分离。本文用经丙基一p一环糊精(HP一p一CD)来分离罗格列酮钠消旋体,分离度为1.6,获得了比较满意的结果。1仪器与试药Agilent HP3D毛细管电泳仪,包括高压电源(0一30 kV)、二极管阵列检测器。毛细管柱为熔融石英毛细管柱75林m x61 em(有效长度52 em,河北永年光纤材料厂)。 经丙基一p一环糊精购自Sigma(色谱纯),实验用水均为超纯水,磷酸二氢钾由北京化工厂生产(分析纯)。 罗格列酮钠原料药由某药厂提供,批号分别为(卫叉)911,O(X) 915,田0916。 罗格列酮钠对照品由某药厂提供,纯度为100.0%。 对照品溶液、供试品溶液、运行缓冲液在使用前均用0.45林m滤膜过滤。2溶液制备2.1对照品溶液的制备精密称量罗格列酮钠对照品20 mg,置100 mL量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液。2.2供试品溶液的制备精密称量罗格列酮钠原料药20 mg,置100 mL量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,作为供试品溶液。2.3运行缓冲液的制备称取经丙基一p一环糊精适量,溶于30 mol·L一’磷酸二氢钾溶液中,使经丙基一p一环糊精的浓度为4%,用2 mol·L一’氢氧化钾溶液调节pH至6.5。3实验方法 毛细管在运行前用1 mol·L一‘氢氧化钠溶液洗30 min,然后用水洗10 min,用运行缓冲液平衡60 min。2次运行之间用1 mol·L一‘氢氧化钠溶液洗2 min,水洗3 min,运行缓冲液洗5 min,10 kV预电泳105,等待0.5 min。运行电压10 kv,检测波长248 nm,操作温度10℃。压力进样:1 000Pa3,。2种异构体的分离图谱见图1。4结果4.1分离度在本实验中,经过多次实验,罗格列酮钠两异构体的分离度均可达1 .6,分离情况良好。4.2精密度取供试品溶液,连续进样5次,计算精密度。第1个异构体峰面 积RSD为2.1%,校正峰面积(峰面积/迁移时间)RSD为2.1%;第2个异构体峰面积RSD为2.0%,校正峰面积RsDt/一in图l罗格列酮钠手性分离图 Fig 1 Chi成sepa田tion of rnsiglitazone sodium1.第l个异构体(小e 6rst enantsomer,Zs.o3min)2.第2个异构体(the seeond en叫tiomer,28.42min)为2.1%。2种异构体峰面积比值和校正峰面积比值R SD均为0.8%。由结果可以看出,2种异构体峰面积比值的精密度比较满意。可以用2种异构 体峰面积比值作为控制罗格列酮钠异构体比例的方法。4.3线性关系的考察精密称取罗格列酮钠对照品30mg,置50 mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.6 mg·mL一‘的对照品贮备液。分别精密量取适量,加水稀释成每1 mL含0.023 72,0.059 30,0.071 16,0.1186,0.2372mg的溶液。依次进样,按上述电泳条件测定。以罗格列酮钠浓 度(mg·mL一‘)为横坐标,以校正峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。罗格列酮钠的浓度在0.02372一0.237 2 mg·mL一‘范围内2个异构体与校正峰面积呈线性关系。第1个及第2个异构体峰的回归方程分别为:A=0.0693+1 1 .48Cr=0.9972A=0.0663+1 1 .62Cr=0.99754.4最小检测浓度取对照品溶液,进一步稀释至。,003 0 mg·mL一’,按上述条件进样,记录色谱图。并对色谱系统进行基线检测,以基线噪声的3倍为最低检测浓度。罗格列酮钠两异构体的最低检测浓度均为0.003 0 mg·mL一‘。4.5样品测定取罗格列酮钠对照品及原料药样品3批(批号为0的911,的的15,《〕00916),用水定量溶解并制成0.2 mg·mL一’的溶液,按上述条件进样,记录色谱图。以校正峰面积分别计算样品中2种异构体的含量及比值。测得3批原料中第1个及第2个异构体的含量分别为48.72%,49 .02%;48.92%,49.72%;48.54%,49,66%。2种异构体的比值分别为0.99,0.98,0,98。5讨论5.1 pH的影响配制30 mol·L一,pH分别为6.0,6,3,6.5,6.8,7.0的含4%经丙基一p一环糊精 的运行缓冲液,测定罗格列酮钠两构型的分离度,结果见图2。由图可知缓冲液的pH对罗格列酮 钠外消旋体的拆分分离度有较大影响。当pH由6增加到6.3时,对分离度影响不大;当pH由 6.3增加到6.5时,分离度增加很大,达到最高,为1.6。当pH由6.5继续增加时,分离度开始降低。因此选择pH6.5为分离条件。7 .5团 图2 pH对分离度的影响凡9 2 The inlluenee of pH on the resolution5.2轻丙基一p一环糊精浓度的影响在毛细管电泳手性分离中,手性试剂的 浓度是影响分离度的重要因素之一。在选定的pH条件下,研究经丙基一p一环糊精浓度对罗格列酮钠手性分离的影响。实验结果表明,在考察的浓度范围(10一50mmol·L一’)内,随轻丙基一p一环糊精浓度增加,罗格列酮钠迁移时间也延长,这是由于增 加了包合物的浓度,降低了溶质的表观迁移率。经丙基一p-环糊精对分离度的影响见图3。当轻 丙基一p一环糊精浓度由1%增加到3%时,分离度增加不大;当轻丙基一p一环糊精浓度由3% 增加到4%时,分离度增加较大,达到最大,为1.6。当经丙基一p一环糊精浓度由4%增加到 5%时,分离度开始降低。因此选用4%作为分离条件。5.3温度的影响温度也是影响手性分离 的重要因素之一。实验表明,当温度越低,罗格列酮钠的毛细管电泳手性分离罗格列酮钠@胡兵$武汉市药品检验所!武汉430012
@俞如英$中国药品生物制品检定所!北京 100050毛细管电泳;;手性分离;;羟丙基-β-环糊精;;罗格列酮钠目的:以羟丙基-β -环糊精为手性分离剂,通过优化其浓度及缓冲液的pH来达到罗格列酮钠(外消旋体,具有2种 异构体)的基线分离,并研究温度对分离的影响。方法:用30mmol·L~(-1)磷酸盐缓 冲液(pH6.5,含4%羟丙基-β-环糊精)作为电泳液,检测波长248nm。结果:罗格 列酮铀的2种异构体分离度为1.6,峰面积比值的精密度(RSD)为0.8%。结论:方法简单、精密度较高。可作为罗格列酮钠的手性分离方法。1GUAN Fu-yu (关福玉). Separation and determination of enantiomers using HPCE (对映异构体的高效毛细管电泳分离与测定).Chin J Anal Chem (分析化学), 1994, 22 (7) : 731
2 Lebovitz HE, Dole JF, Patwardhan R, et al. Rosiglitazone chemotherapy is effective in patients with type 2 diabetes. J Clin Endocrinol Metab, 2001, 86 (1) : 280精对分离度的影响见图3。当轻丙基一p一环糊精浓度由1%增加到3%时,分离度增加不大 ;当轻丙基一p一环糊精浓度由3%增加到4%时,分离度增加较大,达到最大,为1.6。当经 丙基一p一环糊精浓度由4%增加到5%时,分离度开始降低。因此选用4%作为分离条件。5. 3温度的影响温度也是影响手性分离的重要因素之一。实验表明,当温度越低,罗格列酮钠的毛细管电泳手性分离罗格列酮钠@胡兵$武汉市药品检验所!武汉430012
@俞如英$中国药品生物制品检定所!北京 100050毛细管电泳;;手性分离;;羟丙基-β-环糊精;;罗格列酮钠目的:以羟丙基-β -环糊精为手性分离剂,通过优化其浓度及缓冲液的pH来达到罗格列酮钠(外消旋体,具有2种 异构体)的基线分离,并研究温度对分离的影响。方法:用30mmol·L~(-1)磷酸盐缓 冲液(pH6.5,含4%羟丙基-β-环糊精)作为电泳液,检测波长248nm。结果:罗格 列酮铀的2种异构体分离度为1.6,峰面积比值的精密度(RSD)为0.8%。结论:方法简单、精密度较高。可作为罗格列酮钠的手性分离方法。1GUAN Fu-yu (关福玉). Separation and determination of enantiomers using HPCE (对映异构体的高效毛细管电泳分离与测定).Chin J Anal Chem (分析化学), 1994, 22 (7) : 731
2 Lebovitz HE, Dole JF, Patwardhan R, et al. Rosiglitazone chemotherapy is effective in patients with type 2 diabetes. J Clin Endocrinol Metab, 2001, 86 (1) :
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