虎眼万年青 (Ornithogalum caudatum Ait.) ,俗名珍珠草 ,为百合科多年生草本植物 <1 - 2 >。从同属虎眼万年青中分离出的皂甙 OSW-1 <3- 4> 对肺癌、乳腺癌有明显的抗癌活性。体外抗 P3 3 8淋巴细胞白血病活性结果表明 ,OSW-1是常见抗癌药物喜树碱、阿霉素、紫杉醇抗癌活性的 1 0～ 1 0 0倍<5> ,并已由Deng等人首次合成 <6 >。为了进一步了解多糖在提高机体免疫功能方面的作用机理 ,本文作者首先通过非特异性免疫功能试验<7> ,筛选出具有显著增强小鼠巨噬细胞吞噬功能的 60 %醇浓度的虎眼万年青中性多糖 (OCAPS3)。参照一种改进的体液免疫功能测定方法 -溶血素测定方法 <8> ,对 OCAPS3在小鼠体液免疫方面的作用作进一步的研究。1 材料与方法1 .1 动 物 昆明种小鼠 1 2 0只 ,体重1 8～ 2 2 g,雌雄兼用 ,由吉林大学新民校区动物室提供 ,随机分成 7组、5组 ,每组 1 0只。常规颗粒饲料喂养 ,自由饮水。1 .2 吞噬功能试验用药及方法 按蒸馏水对照组、虎眼万年青中性多糖 (OCAPS1 )、40 %醇浓度中性多糖 (OCAPS2 )、 60 %醇浓度中性多糖(OCAPS3)、80 %醇浓度中性多糖 (OCAPS4 )、酸性多糖 (OCAPS5)、人参茎叶皂甙组 (Rg1 ) ,将小鼠随机分为 7组 ,每天灌胃给药 1次 ,剂量分别为蒸馏水对照组 2 0 ml·kg- 1 ,人参皂甙茎叶组 0 .0 2 g·kg- 1(0 .0 5 %的溶液 ,2 0 ml· kg- 1 ) ;其它组多糖浓度均为 2 g· kg- 1 (5 %的悬浊液 ,2 0 ml· kg- 1 ) ,连续1 0 d。末次给药 1 h后 ,由每只小鼠尾静脉注射已配好的 1 6g· L- 1 的胶体碳悬液 0 .1 ml/1 0 g体重。然后根据预试验结果 ,在 2 min和 1 5 min时 ,用吸管(预先用肝素溶液湿润 )经小鼠眼后静脉丛取血 ,每次 0 .0 2 ml,连续 3次 ,将血液置于事先准备好的盛有 5 ml0 .1 % Na HCO3溶液的试管中 ,摇匀。在分光光度计 640 nm波长处分别测定光密度值 A1 和A2 。最后将小白鼠颈椎脱臼处死 ,分别称取肝、脾重量。按下式计算吞噬指数 (α) :α=log A1 -log A2t2 -t11 / 3 × 体重肝重 +脾重1 .3 溶血素试验用药及方法 实验设 5组 ,每组 1 0只小鼠 ,每天灌胃给药 1次 ,剂量为蒸馏水对照组 2 0 ml· kg- 1体重 ,人参茎叶皂甙对照组0 .0 2 g·kg- 1 (0 .0 5 %的溶液 ,2 0 ml· kg- 1体重 ) ,OCAPS33个剂量组 2 .0、1 .0、0 .5 g· kg- 1体重(5 %的悬浊液 ,2 0 ml· kg- 1 体重 )。连续给药 1 0 d后 ,第 1 1天取保存的绵羊红细胞 ,用生理盐水洗涤3次 ,离心 ,弃上清液 ,洗涤后的红细胞以 3∶ 5 (体积比 )用生理盐水稀释 ,使红细胞浓度为每毫升约20亿个。按每只鼠 0 .2 ml腹腔注射 ,免疫 4d后 ,将小鼠处死 ,摘除小鼠眼球 ,将每只小鼠血分别滴至小试管内 ,室温放置 1 h,将凝固血与管壁剥离 ,使血清充分渗出 ,1 h后离心 ,上层血清用生理盐水稀释后取 1 ml,再加入 0 .5 ml绵羊红细胞。置于冰浴中冷却 ,加入 1 ml补体 (以生理盐水 1∶ 1 0稀释过的豚鼠血清 ) ,离心 ,取上清液进行血红蛋白比色测定。样品空白对照以 1 ml生理盐水代替血清样品 ,绵羊红细胞及补体加入量与样品反应管相同。取上述离心后所得上清液 1 ml及 3 ml都氏试剂 ,振荡均匀 ,放置 1 0 min后 ,于 5 40 nm波长下比色 ,测定样品及绵羊红细胞半数溶血时的 A值。按下列公式计算每只小鼠样品的半数溶血值 (HC50 ) :HC50 =样品的 A值绵羊红细胞半数溶血时的 A值 ×稀释倍数2 结 果 2 .1 虎眼万年青各多糖组分对巨噬细胞吞噬功能的作用 实验结果表明 ,与对照组相比 ,OCAPS1 、OCAPS3和 OCAPS5对巨噬细胞吞噬功能均显示不同程度的增强作用 ,其中以 OCAPS3效果最为显著 ,结果见表 1。Tab.1 Effects of OCAPS on phagocytosis ofmacrophages in mice (x± s,n=10 )Group Dose(w B/g·kg-1 ) αControl - 3.96± 0 .6 4Rg1 0 .0 2 5.0 1± 0 .4 9* *OCAPS1 2 .0 4 .6 3± 0 .71*OCAPS2 2 .0 4 .2 4± 0 .6 0OCAPS3 2 .0 4 .88± 0 .53* *OCAPS42 .0 4 .59± 0 .6 9OCAPS52 .0 4 .6 7± 0 .73* * P <0 .0 5,* * P<0 .0 1 com pared with control2 .2 OCAPS3对小鼠抗体形成溶血素的影响 试验结果表明 ,与对照组相比 ,组分 OCAPS3高、中剂量组有明显的增强小鼠体液免疫功能的作用 ,结果见表 2。3 讨 论以往实验结果表明 ,虎眼万年青中总生物碱、总皂甙、总多糖对不同的肿瘤细胞株均显示出一定的抑制作用 ,推测其可能是通过抗肿瘤免疫功能所致。本文作者从虎眼万年青中性多糖对机体免疫功能的影响入手 ,进一步讨论了其抗肿瘤的作用机理。多糖 Tab.2 Effects of neutral polysaccharides OCAPS3 onhaemolysin formation in mice (x± s,n=10 )Group Dose(w B/g· kg-1 ) HC50Control - 2 4 4.10± 35.38Rg1 0 .0 2 779.78± 136 .77* *High dose of OCAPS3 2 .0 54 1.85± 118.6 7*Middle dose of OCAPS3 1.0 54 3.6 3± 156 .76 *Low dose of OCAPS3 0 .52 77.0 5± 50 .17 * P<0 .0 5,* * P<0 .0 1 com pared with control类化合物具有抗肿瘤的作用 ,其作用的发挥主要依赖于对免疫功能的调节。单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一 ,它承担着吞噬销毁细胞内寄生菌、真菌和损伤、衰老的自身细胞的职能 ,巨噬细胞碳廓清指数的多少可以反映其吞噬功能的强弱 ,与肿瘤免疫相关 ,在免疫反应中起着重要的作用<9> 。针对病原微生物 ,体液免疫起着抗感染、免疫调理等作用 ,它可能通过产生抗体与对应的抗原特异性集合产生各种生物学效应。虎眼万年青多糖在促进巨噬细胞吞噬功能的非特异性免疫活性的基础上 ,使巨噬细胞处理和传递抗原的能力增强 ,提高了抗体的水平。由此可见虎眼万年青的防癌、抑癌作用机制可能与其对机体多种免疫细胞的激活有密切关系。OCAPS3对小鼠 T、B淋巴细胞转化率和 NK、LAK细胞活性的作用及对小鼠脾细胞产生白细胞介素 -2(IL-2 )的影响等多种细胞因子的研究工作正在进行当中 ,实验结果将进一步阐明虎眼万年青多糖提高机体抗肿瘤免疫的作用机制 ,为进一步开发利用这一天然药物资源提供理论依据虎眼万年青多糖增强非特异性免疫和体液免疫的作用@石磊$中国科学院长春应用化学研究所!吉林长春130022
@李娟$吉林大学公共卫生学院
@刘志强$中国科学院长春应用化学研究所!吉林长春130022
@刘淑莹$中国科学院长春应用化学研究所!吉林长春130022虎眼万年青中性多糖;;巨噬细胞吞噬功能;;非特异性免疫;;体液免疫;;溶血素目的 :研究虎眼万年青多糖对机体非特异性免疫和体液免疫功能的影响。方法 :采用小鼠碳廓清单核巨噬细胞吞噬功能测定法筛选出虎眼万年青多糖中的有效组分 ,即 60 %醇浓度的虎眼万年青中性多糖 (OCAPS3) ;采用溶血素测定方法研究不同剂量 OCAPS3对小鼠抗体形成的影响。结果 :OCAPS3能显著提高巨噬细胞的吞噬功能以及抗体生成的能力。结论 :证明虎眼万年青多糖能有效地增强小鼠的非特异性免疫和体液免疫功能。<1>中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴(第5册)
.北京:科学出版社,1987.464.
<2>丁景和,曾万章.药用植物学.上海:上海科学技术出版社,1985.225.
<3>Mim akiY,KurodaM,SashidaY,etal.Cholestane glycosideswith potent cytostatic activities on various tum or cells fromOrnithogalum saundersiae bulbs.BioorgMedChemL ett,1997,7:633-636.
<4>M im akiY,KurodaM,SashidaY,etal.A new rearranged cho-lestane glycoside fromO rnithogalum saundersiae bulbsexhibiting potent cytostatic activities on leuk
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