贝母来源于贝母属 Fritillaria L.植物地下鳞茎 ,为常用清热润肺、化痰止咳药。贝母生物碱是其主要成分 ,其中浙贝乙素 (peiminine)和西贝素 (im-perialine,sipeimine)属异甾生物碱。药理实验已证明了浙贝乙素的镇咳镇静作用 <1> 和降血压活性<2 > ;西贝素除具有降压、解痉等药理作用外 <2 > ,最近报道其衍生物具抗胆碱活性 <3>。目前测定贝母生药中单体生物碱含量的方法仅限于薄层扫描法 <4 ,5>和高效液相色谱法<6,7> 。我们在研究贝母中核苷含量分析 <8>的基础上 ,首次运用近年来迅速发展的新型分析技术——毛细管电泳法对贝母中的药效成分浙贝乙素、西贝素和西贝苷 (imperialine- 3β- D- glucoside)进行含量测定 ,与文献报道方法比较具有快速、简便、高效的优点 ,为贝母的质量控制和评价提供了一种新的可靠的分析方法。1 仪器试剂和药品Beckman P/ACE 551 0型毛细管电泳仪 (配二极管阵列检测器 ) ,System Gold软件分析。对照品 :浙贝乙素和西贝苷分别由中国科学院上海药物所劳爱娜教授和吉林中医中药研究院徐东铭教授赠送 ,西贝素购自中国药品生物制品检定所 ,批号 0 767-940 3。内标心得安由华北制药厂提供。贝母生药 :浙贝母购自浙江鄞县药材公司 ,平贝母购自吉林长春医药公司 ,安徽贝母购自安徽霍山县医药商店 ,甘肃贝母购自四川成都德仁堂 ,暗紫贝母由华西医科大学唐心曜教授提供 ,以上贝母均由唐心曜教授鉴定 ;伊贝母购自吉林长春左家 ,由白求恩医科大学徐景达教授鉴定 ;湖北贝母和宁国贝母由安徽医学科学研究所李清华教授提供并鉴定 ;梭砂贝母由云南大理医学院马晓匡教授提供并鉴定。甲醇为色谱纯 ,其余溶剂均为分析纯 ,水为二次重蒸水。2 实验方法和结果2 .1 测定条件 :石英毛细管柱内径 75μm,有效长度 50 cm,毛细管柱温 2 5℃ ;波长 2 0 0 nm;运行缓冲液为 50 mmol/L 磷酸盐缓冲液 (p H=2 .5) ,含1 0 %甲醇 ;压力进样时间 1 s;恒定电压 2 3k V,运行电流约 80 μA;柱清洗为每次进样前分别用水、缓冲液各冲洗 3min。2 .2 对照品、内标溶液配制和标准曲线绘制 :精密称取浙贝乙素、西贝素和西贝苷对照品适量 ,用甲醇分别配成浓度为 4.0 ,4.3和 4.3mg/m L的对照品贮备液备用。另称取内标心得安适量 ,用甲醇制成0 .1 4mg/m L 的内标溶液。测定时精密移取不同量对照品贮备液 ,加等量心得安内标液 ,用甲醇定容 ,得不同浓度标准系列溶液 ,按测定条件检测。以对照品浓度 (X)为横坐标 ,对照品峰面积与内标峰面积比值 (Y)为纵坐标作回归曲线 ,得回归方程 :浙贝乙素 Y=3.681 X- 0 .0 2 2 4 ,r=0 .9996,线性范围 :0 .2 0 0～ 1 .2 0 mg/m L西贝素 Y=9.365X+0 .0 1 2 7,r=0 .9991 ,线性范围 :0 .2 1 5～ 1 .2 9mg/m L西贝苷 Y=5.960 X- 0 .0 72 0 ,r=0 .9995,线性范围 :0 .2 1 5～ 1 .2 9mg/m L2 .3 样品测定 :参照文献生物碱的提取方法<4 ,5> ,精密称取贝母粉 (40目 ) 5g,加氨水 4m L使湿润 ,过夜 ,加入乙醚 -氯仿 -乙醇 (2 5∶ 8∶ 2 .5) 38m L,密塞冷浸 2 4 h。准确吸取上清液 2 5.0 0 m L,蒸干 ,加入内标 ,甲醇定容至 1 m L,用 0 .45μm微孔滤膜滤过 ,滤液稀释后进样测定 ,得样品电泳图谱。图 1为对照品和以浙贝母、平贝母为例的电泳图谱。 9种贝母的全部分析结果见表 1。2 .4 精密度试验 :对同一浓度的对照品标准溶液 ,a-对照品 ;b-浙贝母 ;c-平贝母 ;1-心得安 ;2 -浙贝乙素 ;3-西贝素 ;4-西贝苷图 1 贝母的电泳图表 1 贝母样品中浙贝乙素、西贝素、西贝苷含量测定结果 (% )样品浙贝乙素西贝素西贝苷浙贝母 F.thunbergii Miq 0 .0 2 3 1 0 .0 0 2 14 -暗紫贝母 F .unibracteata Hsiao et K.C.Hsia 0 .0 2 0 6 0 .0 0 2 5 9-甘肃贝母 F .przewalskii Maxim 0 .0 1110 .0 0 173 -湖北贝母 F.hupenensis Hsiao et K.C.Hsia 0 .10 6 0 .0 6 82 -安徽贝母 F .anhuiensis S.C.Chen et S.F.Yin 0 .0 395 --梭砂贝母 F.delavayi Franch -0 .0 0 16 0 -宁国贝母 F .ningguoensis S.C.Chen et S.F .Yin 0 .0 712 0 .119-伊贝母 F.pallidiflora Schrenk -0 .0 5 3 6 0 .0 10 7平贝母 F .ussuriensis Maxim -0 .0 2 5 6 0 .0 449重复进样 6次 ,测定浙贝乙素、西贝素、西贝苷峰面积与内标峰面积比值 ,计算 RSD分别为 0 .8% ,1 .1 % ,0 .9% (n=6)。2 .5 重复性试验 :按上述样品测定方法 ,分别测定6份浙贝母中浙贝乙素、西贝素和平贝母中西贝苷的含量 ,计算 RSD分别为 3.1 8% ,2 .80 % ,3.1 0 %(n=6)。2 .6 加样回收试验 :取已知含量的浙贝母和平贝母 ,浙贝母中加入一定量浙贝乙素、西贝素对照品 ,平贝母中加入一定量西贝苷对照品 ,按以上样品测定方法分别测定浙贝乙素、西贝素、西贝苷的含量 ,计算平均回收率 (n=6)分别为 95.0 % ,RSD=3.52 % ;95.7% ,RSD=3.1 5% ;94.2 % ,RSD=2 .65%。3 讨论3.1 通过实验比较 ,中性和弱碱性缓冲液均不能将样品峰分离 ,采用酸性的磷酸缓冲液消除了电渗流 ,能将样品峰基本分开。加入一定量的有机溶剂作为改性剂 ,不但可降低电渗流、减小离子迁移速率、提高分离度和选择性 ,还能对疏水溶质起到增溶作用。我们在缓冲液中加入 1 0 %甲醇 ,不但使结构极其类似的浙贝乙素和西贝素完全分离 ,而且所有贝母样品中的峰均与内标峰完全分开。3.2 在暗紫贝母和甘肃贝母中测到一定量的浙贝乙素 ,宁国贝母中测到相对多量的西贝素 ,以前均未见文献报道 ,有待进一步研究确证。西贝苷目前仅在平贝母和伊贝母中发现 <9,10 > ,本实验结果与之相符。从本研究结果来看 ,湖北贝母和宁国贝母中药效成分含量相对较高 ,提示有进一步开发应用的价值毛细管电泳法定量分析贝母中几种生物碱@赵霞$上海第二医科大学化学教研室!上海250025
@陆阳$上海第二医科大学化学教研室!上海250025
@陈泽乃$上海第二医科大学化学教研室!上海250025毛细管电泳;;贝母;;浙贝乙素;;西贝素;;西贝苷目的 建立毛细管电泳法 (CE)测定贝母中浙贝乙素、西贝素、西贝苷等生物碱的含量测定方法。方法 以毛细管区带电泳模式 ,用内标法分析了 9种贝母药材中上述生物碱的含量。结果 3种生物碱分离完全 ,并有较好的回收率和重现性。结论 本法快速、简便、高效 ,为贝母的质量控制和评价提供了可靠依据<1> 钱伯初 ,许衡钧 .浙贝母碱和去氢浙贝母碱的镇咳镇静作用
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<2 > 王筠默 ,王恒芬 ,许长照 ,等 .中药研究与文献检索 .上海 :上海远东出版社 ,1994:2 5 1-2 5 2 .
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