肝纤维化是很多慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,其主要病理改变是胶原纤维增生。肝纤维化是由 肝脏的某些细胞(成纤维细胞、贮脂细胞、枯否氏细胞、淋巴细胞)、细胞因子以及细胞外基质等 因素相互作用而形成的〔1〕。细胞角蛋白19片段(又称ｃｙｆｒａ211)和癌胚抗原(ＣＥ Ａ)都是肿瘤标志物,但近来有研究报道肝组织发生纤维化时两者会出现升高现象,并认为可能是 细胞恶变的一个信号〔2〕。初步研究表明慈菇(Ｓａｇｉｔｔａｒｉａｓａｇｉｔｔｉｆｏｌｉ ａ)对ＣＣｌ4致小鼠实验性肝损伤具有保护作用〔3〕。本文拟用慈菇干预ＣＣｌ4致大鼠肝纤 维化过程并对ｃｙｆｒａ211和ＣＥＡ进行观察,探讨慈菇的保健作用。1 材料与方法11 试剂及测定方法 四氯化碳(ＣＣｌ4)分析纯,上海试剂一厂生产,用食用油配成10%浓度。 血清ｃｙｆｒａ211测定采用酶联免疫吸附法(ＥＬＩＳＡ)〔4〕,血清ＣＥＡ测定采用放射 免疫分析法,试剂盒为美国Ｄａｋｏ公司产品,由美国路易斯安那州立大学生理学研究室赠送。以 上测定过程均按说明书进行。12 实验样品 新鲜慈菇采自福建省连城县,取球茎清水洗净、风 干,按重量比1∶1加蒸馏水于磨浆机中磨碎,压滤取汁,于4℃冰箱保存,备用7天。13 实 验动物分组与处理 由福建医科大学医学实验动物中心提供Ｗｉｓｔａｒ大鼠50只,雄性,体重 165～180ｇ,按体重随机分成5组,每组10只。阴性对照组:每日1次灌胃食用油05ｍ ｌ/只;阳性对照组:每日1次灌胃10%ＣＣｌ405ｍｌ/只;低剂量干预组:每日1次灌胃 10%ＣＣｌ405ｍｌ/只,10分钟后再灌胃慈菇汁05ｍｌ/只;中剂量干预组:每日1次 灌胃10%ＣＣｌ405ｍｌ/只,10分钟后再灌胃慈菇汁10ｍｌ/只;高剂量干预组:每日 1次灌胃10%ＣＣｌ405ｍｌ/只,10分钟后再灌胃慈茹汁15ｍｌ/只。所有动物自由给 水和混合普通饲料。12周后断颈处死动物,主动脉采血、分离血清,检测ｃｙｆｒａ211、Ｃ ＥＡ;取肝右叶观察肝病理改变。14 肝组织病理诊断标准 动物处死后,取肝右叶组织,固定 ,包埋,切片,ＨＥ染色和ＶＧ染色,在光学显微镜下观察。用等级分对纤维化程度进行量化分析 :“0”表示肝组织内无胶原纤维增生;“1”表示胶原纤维增生只限于汇管区;“2”表示胶原 纤维增生由汇管区伸入小叶内;“3”表示胶原纤维增生由汇管区伸入小叶内,并有形成假小叶趋 向;“4”表示有假小叶形成。15 数据分析 采用ＳＰＳＳＦＯＲＷＩＮＤＯＷＳ80统计软 件进行方差分析和ＮｅｗｍａｎＫｅｕｌ′ｓ检验。2 结果与分析21 ＣＣｌ4致肝纤维化过 程中肝组织病变及慈菇干预效果的观察(表1)表1 ＣＣｌ4致肝纤维化肝组织病变及慈菇干预 结果(Ｘ±Ｓ)分组纤维化程度(分值)阴性对照组—阳性对照组334±078低剂量干预组2 15±056中剂量干预组132±043#高剂量干预组127±039# 经Ｎｅｗｍａｎ Ｋｅｕｌ′ｓ检验,与阳性对照组比较Ｐ<001,#与低剂量干预组比较Ｐ<001由表1可见 ,阴性对照组未出现纤维化现象,阳性对照组纤维化现象明显,3个干预组的纤维化分值均明显比 阳性对照组降低,中、高剂量干预组的纤维化分值比低剂量干预组也显著为低。各观察组的肝组织 形态见图1～5。22 ＣＣｌ4致肝纤维化病变血清ｃｙｆｒａ211和ＣＥＡ变化及慈菇干预 效果的观察(表2)由表2可见,阳性对照组和3个剂量干预组的ｃｙｆｒａ211均比阴性对照 组明显升高,中、高剂量干预组的ｃｙｆｒａ211比阳图1 阴性对照组,肝组织无异常改变1 0×20图2 阴性对照组,小叶内有纤维增生并有细胞空泡样变10×20图3 低剂量干预组 ,汇管区纤维增生并进入小叶,细胞空泡样变10×20图4 中剂量干预组,汇管区纤维增生并 有轻度细胞空泡样变10×20图5 高剂量干预组,汇管区纤维增生及轻度细胞空泡样变10× 10性对照组明显降低。阳性对照组和低剂量干预组的ＣＥＡ比阴性对照组明显升高,中、高剂量 干预组的ＣＥＡ与阴性对照组无差别,中、高剂量干预组的ＣＥＡ比阳性对照组明显降低。表2 各组大鼠血清ｃｙｆｒａ211和ＣＥＡ测定结果(ρ/μｇ·Ｌ-1,Ｘ±Ｓ)分组ｃｙｆｒａ 211ＣＥＡ阴性对照组163±072396±122阳性对照组584±1431345±6 23低剂量干预组521±1351233±578中剂量干预组364±092#786±41 5#高剂量干预组358±086#779±376# 经ＮｅｗｍａｎＫｅｕｌ′ｓ检验,与 阴性对照组比较Ｐ<005,#与阳性对照组比较Ｐ<0053 讨论细胞角蛋白(ＣＫ)是构成 细胞的一种丝状物,几乎所有的上皮细胞都可被细胞角蛋白表达〔5〕。ＣＫ可分成20个亚单位 ,ｃｙｆｒａ211为其亚单位之一。ｃｙｆｒａ211是一种酸性多肽,通常主要分布在肝、肺 、胃肠道、乳腺、输卵管等上皮细胞和来源于它的癌细胞内。当上皮细胞癌变时,ＣＫ结构不变, 而含量异常升高。当癌细胞溶解或坏死脱落时可释放大量Ｃｙｆｒａ211进入血循环〔6,7〕 。ＣＥＡ是一种多糖蛋白复合物,1965年由Ｇｏｌｄ和Ｆｒｅｅｄｍａｎ首先从胎儿及结肠癌 组织中发现。一般情况下,Ｃ队由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成,通常在妊娠6个月 内ＣＥＡ含量升高,出生时血清ＣＥＡ含量已经低下,健康成年人血清中ＣＥＡ浓度小于25μｇ /Ｌ。当细胞癌变时,相应染色体上的基因发生阻抑,致使原来被阻抑的基因在肿瘤组织重新活跃 起来,产生ＣＥＡ,并释放入血液中〔8〕。ＣＥＡ除含有癌特异性抗原决定簇外,还有与健康人 体内多种抗原相一致的共同抗原决定簇。本实验发现,大鼠因ＣＣｌ4毒性损伤后出现明显肝组织 纤维化,且有明显的血清ｃｙｆｒａ211和ＣＥＡ升高现象,其原因值得深入研究。有研究表明 ,在肝纤维化过程中,某些细胞因子如ＴＮＦα、ＩＬ1(白介素1)、ｓＩＬ2Ｒ(可溶性白介 素2受体)和细胞外基质如ＦＮ可能是启动胶原纤维增生的因素〔9〕,但还需要实验证实。已有 研究表明给大鼠灌饲慈菇汁有增加机体抗氧化能力的作用,对大鼠ＣＣｌ4肝毒性具有保护作用, 这种作用可能与慈菇含有的维生素Ｃ、维生素Ｅ、硒及其它多种维生素和微量元素,尤其以富含维 生素Ｅ有关〔3,10〕。本实验结果发现高剂量慈菇干预组的ｃｙｆｒａ211比ＣＣｌ4损伤 阳性对照组明显降低;中高剂员慈菇干预组的ＣＥＡ与阴性对照组无差别,而比ＣＣｌ4损伤阳性 对照组明显降低。对慈菇的这一干预作用的现象及其机理需要做深入细致的研究,若这种作用得到 肯定,将对深入研究慈菇的保健功能,并使之应用于肝脏疾病和肿瘤的防治等领域,具有重要的参 考意义慈菇对CCl_4致大鼠肝纤维化血清cyfra21-1和CEA影响的探讨@吴小南$ 福建医科大学卫生学教研室!福州350004@汪家梨$福建医科大学卫生学教研室!福州35 0004@盛健$福建医科大学生物化学教研室@黄建宏$DeptofZoologyandP hsiolog!LouisianaStateUniversity,U.S.A.LA70 803慈菇;;肝纤维化;;肽碎片类;;癌胚抗原目的 探讨慈菇对CCl4致大鼠肝纤维化的 干预作用。方法 对5月龄Wistar大鼠,用CCl4染毒致大鼠形成肝组织纤维化,以EL ISA法和放射免疫分析法检测大鼠血清cyfra211和CEA的浓度的变化,并观察慈菇的 干预效果。结果 染毒组大鼠cyfra211和CEA明显高于对照组,慈菇可减轻CCl4致大鼠肝纤维化程度并减少cyfra211和CEA的产生。结论 大鼠肝纤维化后血清cyfra211和CEA升高,提示慈菇干预作用的机理值得深入探讨1 PetersonTC ,IsbruckerRA .Fibroproliferationinliverdisease:Roleofmonocytefactors.Hepatology ,1 992 ,1 5 :1 91 .
2 BodenmullerH .Technicalevaluationofanewautomatedtumormarkerassay :theenzymum teseCYFRA2 1 1In :HapdorR .Tumorassociatedantigens ,oncogenesreceptors,cytokinesintumordiagnosisandtherapyatthebeginningofthe 90th.Zuckschwenlt:Verlag ,1 992 ,1 37.
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