格列吡嗪片在健康志愿者体内的生物等效性评价

格列吡嗪（glipizide）是一种亲脂性弱酸，为第二代磺脲类口服降血糖药。口服吸收快速 完全，且无首过作用，其体内作用机理是直接刺激胰岛素β细胞的分泌功能，促使内源性胰 岛素的释放增加而降低血糖。临床疗效确切［1］，常用于治疗Ⅱ型糖尿病。当今该 药生产厂 家众多，药品质量问题较为普遍，如辅料及生产工艺等因素的不同即可直接造成格列吡嗪片 在人体内药物释放特征的改变［2.3］，释药过快往往可导致患者血糖过低，而释药 过慢则降 血糖效果不佳。为确保我院临床用药的质量，我们采用两周期交叉、随机、自身对照的方法 ，比较评价了国产及进口格列吡嗪片在人体内的药动学及生物等效性，旨在为临床合理用药 提供参考依据。1 材料与方法1.1 仪器与试药 LC-10AVP高效液相色谱系统，7725型进样阀（配100μl定量环），SPD-M 10 Avp二极管阵列紫外可见检测器，CTO-10 Asvp柱箱，Class-vp5.0色谱工作站；Hype rsil C18不锈钢分析色谱柱（150 mm×4.6　mm，5　μm）。试验品格列吡嗪片(西安 金花企业集团股份 有限公司高新制药厂研制，批号：981010，5 mg/片);参比品格列吡嗪片(意大利Farmitalia Carlo Erba公司，批号：990521，5　mg/片);格列吡嗪标准品(西安金花企业集团股份有限 公司高新制药厂提供,含量为98.91%）。1.2 色谱条件 按文献［4.5］法加以改进，流动相为改性乙腈（1 000 ml乙腈中含1 ml三乙胺 和1.5　ml冰醋酸）-水=40∶60，固定相为Hypersil C18柱（150 mm×4.6 　 mm，5　μm），流速1　ml·min-1；检测波长225　nm（在本条件下，经UV扫描，该 波长为最大吸收处）。1.3 血浆提取方法 精取样品血浆1.0 ml于试管中，加入适量格列 吡嗪标准液，每支试管均 加入0.5 mol·L-1盐酸200　μl，漩涡混合1　min。再加入5.0 ml氯仿，漩 涡混合萃取3　min，离 心（15000 r·min-1，-15℃）10　min。精取氯仿层4.0 ml于尖底试管中，在40 ℃水浴中以氮气流挥干，残渣加130　μl甲醇漩涡混合溶解（冰浴中），进样100　μl分析 。1.4 标准曲线的制备 取混合人空白血浆1.0 ml共8份，分置于试管 中，分别加入适量格列吡 嗪标准液，按上法提取分析，建立标准曲线。检测范围10.317～810.59　ng·ml -1，得回归方 程：C=1.9628×10-3A+1.6693（r=0.999，n=6），最 低检测浓度为8 ng·ml-1（S/N=3）。1.5 方法回收率 取1.0 ml混合空白人血浆18份，配制成高、中、 低3个不同浓度的格列吡 嗪标准样品（618.9960，265.2840，32.4236 ng·ml-1），每种浓度配 6份。按本方法测定 ，以实测值与理论值之比计算方法回收率。结果3种浓度的格列吡嗪标准血浆质控品方法回 收率分别为（81.2±1.1）%，（81.1±0.8）%和（79.2±0.8） %。1.6 方法精密度 取1.0 ml混合空白人血浆18份，配制成高、中、 低3个不同浓度的格列吡 嗪标准样品（707.424,221.070和29.476 ng·ml-1），每种浓度配6份 ，在1 d内按本方法测 定。结果日内RSD分别为2.40%,0.82%和1.56%。在6　d内每日配制高、中、低3 个不同浓度的格 列吡嗪标准血浆样品（707.424,221.070和29.476　ng·ml-1）各1份 ，并于配制当日以本方法测定。结果日间RSD分别为1.99%,1.56%和3.65%。1.7 志愿者及实验设计 12例男性健康受试者，年龄18～27岁，体 重（60.9±7.9）　kg，身高 （170.6±3.7）　cm；血、尿常规、肝功、肾功及心电图检查均正常，无药物过敏 史。志愿者 受试前禁食12　h，于清晨7时空腹用200　ml温开水口服格列吡嗪片10　mg，于服药前及服 药后0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，17　h分别静脉采血5　ml，置肝素抗 凝管中，分离出血浆后密封置-20℃冰箱中保存至测定。间隔2周后交叉服用格列吡嗪片剂。 1.8 数据处理 血药浓度-时间原始数据用张文贵等编制的实用药动学 计算程序3P97处理， 求算药动学参数，并以该程序进行生物等效性评价（采用双单侧t检验法）。T max和Cmax均 采用实测值，以梯形法求算AUC。 用双单侧t检验法对主要药动学参数AUC(0-17) 、Tmax和Cmax进行生物等效性评价，计算前对参数进行对数转换。2 结果2.1 色谱分离 在本色谱条件下，格列吡嗪的保留时间为5.88 min ，血浆中干扰物质与格列吡嗪可达基线完全分离，确保分析的专一性，结果见图1。图1 格列吡嗪色谱图A.格列吡嗪标准液；B.空白人血浆；C.样品血浆，TR Glipizide=5.88　min2.2 药-时曲线 两种制剂交叉给予12名受试者后，其药-时曲线 经拟合符合口服一室开放模型，见图2。图2 健康志愿者口服10 mg格列吡嗪后血浆中格列吡嗪的 药-时曲线（n=12，±s，●国产格列吡嗪片；▲进口格列吡嗪片）2.3 药动学及生物等效性分析 以梯形法求算两种格列吡嗪片的AUC （0-17）、AUC（0-∞），Tmax和Cmax采用实测值，以消除 相血药浓 度的对数与对应点时间的线性回归求算格列吡嗪片的体内消除半衰期。结果表明：两种制剂 在健康志愿者体内的处置均符合口服一级吸收一室开放模型，其主要药动学参数见表1。 表1 12名健康志愿者口服10 mg格列吡嗪片后的药动学参数（ ±s）参 数国产格列吡嗪片进口格列吡嗪片Cmax/ng·ml-1609.7±112.9568. 8±101.9Tmax/h2.6±0.52.6±0.5T1/2/h2.8±0. 42.7±0.4MRT（0-17）/h5.5±0.45.4±0.4MRT（0- ∞）/h5.9±0.55.8±0.5AUC（0-17）/ng·h·ml-14499.8±969.04108.3±724.9AUC（0-∞）/ng·h·ml-14626.9±1020.44207.7±730.9 以进口片为参比制剂，国产片为试验制剂，求得国产格列吡嗪片相对生物利用度F=（ 109. 5±4.5）% ，将两种制剂的主要药动学参数Cmax、Tmax和AUC 经双单侧t检验，结果表明，两种制剂具有相同的生物效应。3 讨论在确定色谱分离条件时，经系统性比较，采用改性乙腈与水做流动相效果最佳，与报道的甲 醇-磷酸缓冲液［6］相比，不但柱压明显降低，而且分离度及灵敏度显著提高，格 列吡嗪的保留时间从10.3　min缩短到5.8　min，大大缩短了样品分析的时间。本文评价了国产及进口2种格列吡嗪片的生物等效性，结果表明，国产格列吡嗪片各时间点 的 浓度及Cmax、AUC均较进口某企业的格列吡嗪片略高，但各参数之间均无统计学 差异，表明该两种制剂在临床可视为生物等效。格列吡嗪片在健康志愿者体内的生物等效性评价@文爱东$第四军医大学西京医院! 陕西 西安 710032
@赵磊$第四军医大学西京医院! 陕西 西安 710032
@张三奇$第四军医大学西京医院! 陕西 西安 710032
@杨志福$第四军医大学西京医院! 陕西 西安 710032
@蒋永培$第四军医大学西京医院! 陕西 西安 710032格列吡嗪;;药动学;;生物等效性;;高效液相色谱法目的：比较两种格列吡嗪片剂在健康志愿者体内的药动学及 生物等效性。方法： 12例男性健康志愿受试者，采用标准两周期交叉设计自身对照试验法，单剂量口服进口和国 产格列吡嗪片10 mg，以高效液相色谱法测定血浆中格列吡嗪的经时浓度，以双单侧t检 验统计法比较两种格列吡嗪片之间的差异。结果：两种格列吡嗪片在健康志愿者体内的药-时曲线均符合一级吸收的单室模型，国产格列吡嗪 片主要的药动学参数Tmax 、Cmax和AUC(0-17)分 别为：(2.6±0.5) h ，(609.7±112.9) ng·ml-1和(4499.8 ±969.0) ng·h-1·ml-1；进口 格列吡嗪片主要的药动学参数Tmax 、Cmax和AUC(0-17)分别为 ：(2.6±0.5) h, (568.8±1 01.9) ng·ml-1和(4108.3±724.9) ng·h·ml-1。两种格列吡嗪 片主要药动学参数间均无 统计学差异（P＞0.05），国产格列吡嗪片相对生物利用度F为（109.5± 4.5）%。结论：两种格列吡嗪片在健康志愿者体内具有相同的生物效应，可确保临床用药的安全有效。<1> Feldman EC,Nelson RW,Feldman MS. Intensive 50 week evaluation of glipiz de administration in 50 cats with previously untreated diabetes mellitus. J Am Vet Med Assoc, 1997, 210(6): 772.
<2> Burge MR, Schmitz FK, Sood V, et al. Effect of immediate-release gl

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