血府逐瘀汤抗心肌缺血及耐缺氧作用的实验研究

血府逐瘀汤系清代名医王清任集四十余年经验所创 ,是理气化瘀要方 ,专治“胸中血瘀证”,始收于《医林改错》上卷 ,全方由当归、生地黄、桃仁、红花、枳壳、赤芍、柴胡、桔梗、川芎、牛膝、甘草等 11味中药组成 ,在临床上广泛用于预防和治疗冠心病、肺心病、心肌梗塞等血瘀证 ,并取得了较满意的疗效 <1 ,2 >。该方颇受后世医家推崇 ,被尊为中医十大名方之一。有实验证明 ,血府逐瘀汤有抗心肌细胞损伤 ,保护心肌的作用 <1 ,2 > ,但其具体作用机制不详。本研究采用大鼠急性心肌缺血模型和小鼠常压耐缺氧试验 ,探讨了血府逐瘀汤的作用及机理 ,为血府逐瘀汤防治瘀血病证的科学性提供了实验依据。1　材料与方法1.1　血府逐瘀汤对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用1.1.1　血府逐瘀汤当归 90 g,生地黄 90 g,桃仁 12 0 g,红花 90 g,枳壳 6 0 g,赤芍 6 0 g,柴胡 30 g,桔梗 5 0 g,川芎 5 0 g,牛膝 90 g,甘草 30 g。药物购自浙江中医学院门诊部中药房 ,煎前经清水漂洗 3次 ,加重蒸水 2 0 0 0 ml浸泡 30 min后 ,直火煎沸 30 m in,收集煎煮液 ,药渣再加重蒸水 15 0 0 ml,同前煎沸 2 0 min,合并两次滤液 ,40 0 0 rpm离心 15 min后 ,取上清液 ,浓缩至每 m l含生药1g。分装灭菌 ,备用。1.1.2　动物及分组　 SD大鼠 40只 ,随机分成 4组 ,每组 10只 ,雌雄各半。体重 32 8.1± 30 .1g,购于浙江医学科学院实验动物中心 ,实验动物均喂饲基础饲料。血府逐瘀汤干预低、高剂量组 ,实验前每天连续灌服血府逐瘀汤 10 m l(7.6 g) / kg、10 ml (2 2 .8g) / kg,分别相当于人体体重比 5、 15倍 ,正常组、模型组灌服生理盐水 10 ml/ kg。1.1.3　实验方法于第 7d给药 1h后 ,模型组、中药干预组大鼠腹腔注射垂体后叶素 10 IU/ kg,造成大鼠急性心肌缺血 ,6 0 min后 ,摘眼球取血 ,离心分离血清。1.1.4　血清酶测定 :血清中的乳酸脱氢酶 (L DH)、磷酸肌酸激酶 (CPK)、羟丁酸脱氢酶 (HBDH )、谷草转氨酶(AST)等由浙江省中医院检验中心用 Beckm an全自动生化仪测定 ;超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒 ,按测试说明书操作 ,75 4分光光度计比色测定。1.2　常压小鼠的耐缺氧实验1.2 .1　血府逐瘀汤及制备方法同上1.2 .2　实验动物及分组ICR小鼠 80只 ,购于浙江医学科学院实验动物中心 ,体重 2 0± 2 g,雌雄各半。小鼠随机分给药高、中、低剂量组及对照组 4组 ,每组 2 0只 ,给药各组小鼠每 d分别给予血府逐瘀汤 7.6 g/ kg、 15 .2 g/ kg、 2 2 .8g/ kg体重灌胃 ,用药剂量相当于 5 0 kg体重人的 5、 10、 15倍 ,对照组给同体积生理盐水 ,连续灌胃 7d。1.2 .3　实验方法于末次给药 30 m in将所有小鼠均置于盛有钠石灰的2 5 0 ml广口瓶中 ,加盖密封 ,记录停止呼吸的时间 (存活时间 )。1.3　对所有测定数据进行统计学分析 ,以均数±标准差 (x±s)表示 ,差异显著性以 t检验判定。2　结果2 .1　血府逐瘀汤对急性心肌缺血大鼠血清 HBDH、 CPK、L DH、 AST、 SOD、MDA的影响如表 1所示 ,急性心肌缺血模型组大鼠血清 HBDH、L DH、 CPK同正常组比较有升高趋势 ,AST差异显著 (P<0 .0 5 ) ,说明模型组缺血大鼠心肌细胞已经受到损伤 ,导致心肌细胞内酶类的释放 ;喂饲低、高剂量血府逐瘀汤组大鼠血清HBDH、CPK、 L DH、 AST同模型组比较 ,有降低趋势 ,高剂量组 CPK、AST、HBDH及低剂量组 AST同模型组比较有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,高剂量组 L DH同模型组比较有显著差异 (P<0 .0 1)。以上结果说明血府逐瘀汤能降低急性心肌缺血大鼠血清 HBDH、 CPK、 L DH及 AST,能减轻缺血大鼠细胞内各种酶类的释放 ,对大鼠心肌缺血损伤起到保护作用。由表 2可以看出 ,模型组 SOD与 MDA同正常对照组比较有显著差异 ,说明模型组大鼠在心肌缺血的情况下体内产生了大量自由基 (P<0 .0 1)。模型组 SOD同血府逐瘀汤治疗低、高剂量组比较有显著差异 ,模型组 MDA同血府逐瘀汤治疗高剂量组比较有显著差异。说明血府逐瘀汤能降低急性心肌缺血时大鼠体内的 MDA,升高体内的 SOD,清除体内自由基 ,从而对大鼠心肌缺血损伤起到保护作用。表 1　血府逐瘀汤对急性心肌缺血大鼠血清 HBDH、CPK、L DH、 AST的影响 (x±s,n=10 )组别 HBDH (U/ L ) CPK (U / L ) LDH (U/ L) AST (U/ L)正常对照组 5 6 3.9± 130 .2 10 32± 40 7 5 99.7± 193.7 139.6± 2 3.2 *低剂量组 6 33.3± 2 13.6 10 2 2± 2 90 6 83.5± 2 2 8.0 14 1.6± 13.1*高剂量组 416 .9± 12 4.4* 82 4± 15 7* 5 10 .0± 138.1* * 14 5 .5± 37.0 *模型组 791.8± 40 9.2 10 41± 2 87 711.4± 2 0 5 .4181.1± 2 7.0　　 *与模型组相比 P<0 .0 5,* *与模型组相比 P<0 .0 1 )表 2　血府逐瘀汤对大鼠急性心肌缺血后血清SOD、 MDA的影响 (x± s,n=10 )组别 SOD(U / ml)MDA(n MOL / g)正常对照组 5 96 .6 5± 2 8.5 2 * * 6 .41± 2 .0 4低剂量组 5 2 9.80± 11.44* 7.32± 1.72高剂量组 5 5 7.86± 2 1.94* 6 .73± 1.2 0 *模型组 5 0 4.47± 2 4.2 0 8.0 4± 1.5 4　　 *与模型组相比 P<0 .0 5,* *与模型组相比 P<0 .0 1 2 .2　血府逐瘀汤对小鼠耐缺氧能力的影响由表 3可见喂饲血府逐瘀汤能提高小鼠耐缺氧能力 ,但在不同性别之间其耐缺氧能力不同 ,雌性小鼠对照组耐缺氧能力大于雄性小鼠对照组 ,差异显著 (P<0 .0 1) ;喂饲血府逐瘀汤雌性小鼠虽能提高耐缺氧能力 ,但其低、中、高剂量组同对照组比较耐缺氧能力无显著差异 (P<0 .0 5 ) ;而喂饲血府逐瘀汤雄性小鼠能显著提高其耐缺氧能力 ,同对照组比较有显著差异 ,而且呈剂量依赖性。雄性小鼠平均最高延长率可达到 5 0 .0 2 % (高剂量组 ) ,而雌性小鼠平均最高延长率只达到 9.49% ,同样雄性小鼠最长存活时间可以达到 49m in,而雌性小鼠最长存活时间只达到 46 .5 min。表 3　血府逐瘀汤对小鼠耐缺氧能力的影响 (x± s,n=10 )组别 性别平均存活时间 (min)平均延长率 (% )最长存活时间 (min)对照组雌 2 9.71± 3.86 36 .3对照组雄 2 1.45± 2 .0 9△ 2 3.5低剂量组雌 32 .5 3± 5 .999.4945 .8低剂量组雄 2 6 .80± 4.72 * * 2 4.9435 .9中剂量组雌 31.6 8± 6 .6 86 .6 3 40 .8中剂量组雄 2 9.47± 8.5 2 * 3 7.3946 .5高剂量组雌 31.0 1± 6 .81* 4.3842 .9高剂量组雄 32 .18± 8.5 5 * * 5 0 .0 2 49.0　　 *与对照组雌性小鼠相比 P<0 .0 5,* *与对照组雄性小鼠相比 P<0 .0 1 ,△与对照组雄性小鼠比较 P<0 .0 1 3　讨论王清任是我国医学史上血瘀证及活血化瘀集大成者 ,他创立的按部位论治血瘀证的理论在今天的临床实践中仍具有重要的指导意义。根据王清任对血府的界定 ,心脏在血府所辖范围 ,心脏缺血缺氧的症状为他所列的血府血瘀之证 ,如心疼胸痛、心跳心慌等。从现代医学研究看 ,心脏缺血所致的瘀血病理改变与血府血瘀证如胸痹心痛等密切相关 ,因而活血化瘀成为治疗胸痹心痛的根本大法。血府逐瘀汤由桃红四物汤和四逆散加桔梗、牛膝组合而成 ,桃红四物汤活血化瘀 ,四逆散疏肝理气。当归、川芎、赤芍、红花、桃仁行瘀血 ,牛膝通血脉、祛瘀血 ,并引瘀血下行 ,为方中主要组成成分 ;“气为血帅”“气行则血行”,故又配伍柴胡疏肝解郁、升达清阳 ,枳壳、桔梗开胸行气 ,使气机调达 ,则血行流畅 ,生地黄凉血清热 ,配当归又养血润燥 ,使祛瘀而不伤阴血。因此血府逐瘀汤成为治疗胸痹心痛的首选方药。血府逐瘀汤作为治疗血府血瘀的代表方剂对冠心病心绞痛具有良好的治疗作用 ,这已被大量的实验及临床研究表明 <1 - 7>。本试验又证实其具有拮抗垂体后叶素所致大鼠心肌缺血及提高小鼠耐缺氧能力之作用 ,这为其理气活血化瘀作用又提供了现代药理依据。心脏缺血导致大鼠心脏组织细胞的缺氧 ,是一个基本的和重要的病理生理环节 ,因此本方的强心耐缺氧能力作用可能是其防治冠心病的基础。垂体后叶素致心肌缺血主要是通过强烈的收缩血管作用使冠状动脉痉挛导致心肌供血不足 ,导致心肌组织缺氧 ,从而使细胞受到损伤 ,使细胞内的各种酶漏出。本试验结

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