头孢克罗（cefaclor,Cef）为第二代口服头孢类抗菌素，其抗菌活性较头孢氨苄为强， 特别适用于耐氨苄青霉素及阿莫西林者，对儿童急性中耳炎尤为有效，为国外应用较广泛的头孢菌 素，国内近年已上市。本品口服吸收完全，半衰期短，主要经肾排泄［1～3］。关于Cef血药 浓度测定方法国外文献已有报道［1,4］，国内有报道用外标法测定Cef血药浓度［3,5］。本文采用高效液相色谱（HPLC）内标法测定Cef血药浓度，现将方法及结果报告如下：1材料与方法1） 仪器：Beckman 334型高效液相色谱仪，YWGC18色谱柱（150 mm×4.6 μm）,Waters 86可变波长检测器，Beckman 427型积分仪。2） 试剂：头孢克罗标准品（99.9%上海市药品检验所提供），重蒸水配成100 μg/ml冰箱保存；头孢拉定（内标含量99.9%上海市药品检验所提供），重蒸水配成100 μg/ml冰箱保存。甲醇为色谱纯，醋酸纳、冰醋酸等均为AR级。3） 色谱条件：流动相为甲醇-0.001 M醋酸盐缓冲液（PH3.5）-二乙胺（15∶85∶0.5 V/V/V），检测波长265 nm，流速1.0 ml/min，灵敏度：0.02 AUFS，纸速0.25 cm/min,进样量20 μl。4） 血清提取方法：取血清0.4 ml，加入内标（100 μg/ml）0.1 ml和甲醇1.0 ml,旋涡振荡2 min,离心15 min(1 400 r/min),吸取上清液20 μl进样分析。5） 标准曲线制备:配制含Cef 0.25,1,5,10,15,20,25,30,35 μg/ml的系列标准血清样品5份,取血清0.4 ml用上法提取,以血清标准管的浓度(加入值μg/ml)对样品峰面积与内标峰面积比作标准曲线。6） 回收率和精密度测定:日内精密度:分别配制含Cef浓度为2,20,35 μg/ml的标准血清样品5份,在同一天内进行样品处理和测定。日间精密度:按上法配制标准血清样品各5份,于2,4,6,8,10 d中进行同样的样品处理及测定回收率和精密度。萃取回收率测定:取浓度为2,20,35 μg/ml的血清提取物用HPLC分析得到的色谱峰面积与未经提取的标准品用流动相稀释至同样浓度得到色谱峰面积之比得萃取回收率(绝对回收率)。2 结果1） 色谱图见附图。上述色谱条件下Cef和内标的保留时间分别为7.35和12.55 min.二者峰形尖锐,空白血清图对应Cef和内标的保留时间处无杂峰出现,与各无关峰分离良 好。附图中A为空白血清色谱图,B为标准品加内标物色谱图,C为空白血清中加入标准品及内标色谱图。2） 线性关系及最低检测浓度0.25 ～ 35 μg/ml范围内,Cef峰面积与内标峰面积比对Cef浓度进行线性回归,得回归方程为Y=0.065 6+0.041 3X,r=0.999 3。最低血清检测浓度为0.125 μg/ml。3 讨论国外文献报道［1,4］,高效液相色谱法测定头孢克罗的色谱条件多采用含乙腈的流动相,而 乙腈不仅价格昂贵,毒性较大,而且纯度要求高。国内有报道用HPLC外标法测定Cef血药浓 度［3］。本实验采用含甲醇的流动相，并对流动相比例进行筛选，确定用甲醇∶醋酸钠缓冲液（ 15∶85）。以头孢拉定为内标，组份在该流动相中分离良好，Cef保留时间适宜。因Cef 有酸碱兼性的特点，不宜用有机溶剂提取，采用甲醇沉淀蛋白，上清液直接进样色谱图上无杂质干 扰峰，方法简便、快捷、相对回收率和精密度试验的RSD均＜6%，重复性较好。高效液相色谱内标法测定人血头孢克罗浓度@李菊香$江西医学院第二附属医院心内科!江西南昌 330006
@陈秋潮$上海医科大学附属中山医院临床药理室!上海 200032
@李雪宁$上海医科大学附属中山医院临床药理室!上海 200032高效液相色谱法;;头孢克罗;;血清浓度目的与方法：建立高效液相色谱内标法测定 人血清中头孢克罗浓度。以甲醇为蛋白沉淀剂，头孢拉定为内标，流动相为甲醇∶醋酸缓冲液∶二乙胺（15∶85∶0.5V/V/V），检测波长265 nm，流速1.0 ml/min，记录纸速0.25 cm/min。结果：浓度在0.25 ～ 35 μg/ml范围内呈良好线性关系，标准曲线的回归方程为Y=0.065 6+0.041 3 X，相关系数r=0.999 3，萃取回收率为83.6%，最低检测浓度0.125 μg/ml。结论：本法简单、快速，日内和日间回收率和精密度试验的相对标准差（RSD）均＜6%，重复性好。<1> Nahata M C .Determination of cefaclor by high-performance liquid chromatographjy
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