鸟鸡白凤丸是妇科良药 ,收载于《中国药典》2 0 0 0年版一部 ,具有补气养血、调经止带等功效 ,对于气血两亏、月经不调、崩漏带下等症有很好的疗效。我们在对不同产地、不同批号的乌鸡白凤丸检品 ,按药典项下做芍药苷的薄层层析鉴别时 ,其中有 4批样品未检出芍药苷 ,但显微镜下观察均发现有白芍的显微特征。为此 ,我们对这 4批样品 ,通过药典法及其改进的比较分析 ,筛选优化了实验条件及提取方法 ,结果均检出芍药苷 ,斑点清晰、不拖尾 ,背景干扰也可降到最低限度 ,且灵敏度高 ,为白芍在中成药中的鉴别及薄层扫描提供一定的方法依据。材料与方法1 实验材料及试药 芍药苷对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;样品 4批 (分别来自江西、福建、河北等不同厂家生产 ) ,
聚酰胺、中性氯化铝 (上海五四化学试剂厂生产 ) ;层析玻璃柱 ( 1ｃｍ ,1 5ｃｍ) ,硅脑Ｇ(青岛海洋化工厂 ) ;试剂均为分析纯。2 实验方法与结果2 .1 供试品溶液Ⅰ (药典法制备 ) 分别取以上 4批样品 1 8ｇ ,切碎 ,加硅藻土 1 2 ｇ ,研匀 ,加氯仿 1 0 0ｍｌ,加热回流 1 .5ｈ ,滤过 ,弃去氯仿液 ,残渣加乙醇 40ｍｌ,温浸 1ｈ ,时时振摇 ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加水 30ｍｌ溶解 ,用水饱和的正丁醇提取 3次 ,每次 2 0ｍｌ,合并正丁醇提取液 ,用水洗 2次 ,每次 2 0ｍｌ,正丁醇液置水浴浓缩至约 1ｍｌ,加适量氯化铝在水浴上拌匀、干燥 ,装在氧化铝小柱 (2 0 0目 ,1 ｇ , 1ｃｍ)上 ,以醋酸乙酯 甲醇 (1 1 ) 30ｍｌ洗脱 ,收集洗脱液 ,蒸干 ,残渣加乙醇 1ｍｌ溶解 ,作为供试品溶液Ⅰ ,编号为Ⅰ1、Ⅰ2 、Ⅰ3、Ⅰ4 。2 .2 供试品溶液Ⅱ (改进法制备 ) 分别取上述 4批样品 1 8ｇ ,切碎 ,加硅藻土研匀 ,加甲醇30ｍｌ,超声波处理 30分钟 ,滤过、滤液蒸干 ,残渣加水 1 0ｍｌ溶解 ,加于聚酰胺柱 (50目～ 70目 ,0 .5ｇ , 1ｃｍ)上 ,用水 1 5ｍｌ洗脱 ,洗脱液用水饱和的正丁醇提取 2次 ,每次 2 0ｍｌ,合并提取液 ,用 0 .1 5ｍｏｌ Ｌ的ＮａＯＨ液洗涤 2次 ,每次 1 0ｍｌ,再用水洗至中性 ,分取正丁醇液 ,水浴蒸干 ,残渣加甲醇 1ｍｌ溶解 ,作为供试品溶液Ⅱ ,编号为Ⅱ1、Ⅱ2 、Ⅱ3、Ⅱ4 。2 .3 对照品溶液制备 精密称取芍药苷对照品适量 ,加甲醇制成每 1ｍｌ含 1ｍｇ的溶液 ,作为对照品溶液。2 .4 薄层层析 照薄层色谱法 (中国药典2 0 0 0年版一部附录ＶＩＢ)试验 ,吸取上述供试品溶液各 5μｌ,对照品溶液 2 μｌ,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上 ,以氯仿 醋酸乙酯 甲醇 甲酸 (40 5 1 0 0 .2 )为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 5%香草醛硫酸溶液 ,1 0 5℃烘至斑点清晰 ,见图 1。1～ 4:供试品溶液Ⅰ (Ⅰ1、Ⅰ2 、Ⅰ3、Ⅰ4 ) ; 5 :芍药苷对照品 ; 6～ 9:供试品溶液Ⅱ (Ⅱ1、Ⅱ2 、Ⅱ3、Ⅱ4 ) 图 1 乌鸡白凤丸中芍药苷的ＴＬＣ图谱讨 论1 )芍药苷为黄酮的花青素类、有 5个羟基 ,可与聚酰胺分子中的酰胺羰基形成氢键 ,而产生吸附作用 ,加之洗脱时容易、快速 ,因此用甲醇作溶剂 ,超声 ,过聚酰胺柱 ,洗脱液再经正丁醇萃取 ,碱及水洗除去糖类、酸性成份及色素等极性较大的杂质 ,以达到纯化的目的。从薄层图谱来看 ,药典法中 4批样品与对照品相应位置上很难观察到斑点 ,而改进法效果较好 ,背景无黄色条痕 ,斑点呈紫褐色 ,集中 ,不拖尾。2 )曾试验将药典法中的氧化铝细度与高度都相应增加 ,经ＴＬＣ图谱观察 ,有一微弱的紫褐色斑点 ,这样操作即繁琐、洗脱时又费时 ,不易洗脱。由此可见 ,氧化铝的细度及高度对芍药苷的提取有很大影响 ,而改进法操作简便、省时 ,背景干扰可降到最低限度 ,且灵敏度高 ,可用于白芍在中成药中的薄层鉴别及扫描测定乌鸡白凤丸中芍药苷薄层层析的几种提取方法的比较分析$青海省药品检验所!(810000)@杨凤梅
$青海省药品检验所!(810000)@王慧春
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