癫痫是一种以脑神经元异常过度放电所致的突然反复和短暂的中枢神经系统功能失常为特征 ,危害人类的疾病 ,其中８０ %见于儿童。从其机理而言 ,大多报道与神经元兴奋递质有关 ,形态学显示 :癫痫状态下 ,中枢神经系统发生了一系列变化 ,如轴突的芽生现象以及突触的重建等。中医大多医家认为与痰密切相关 ,有“无痰不作眩”之说 ,即脾虚痰浊内生 ,痰随气逆 ,蒙蔽清窍而致。多为脾虚痰浊闭窍所致。目前治疗癫痫仍以药物控制发作为主。因患者需长期服药 ,而一些抗痫西药在治疗的同时 ,其毒副作用及癫痫本身的损害 ,使很多患者特别是儿童患者的大脑发育和认知功能受到影响。因此 ,能有效控制病情而无毒或毒副作用低的抗痫药物有待研制、应用。本研究采用吖啶橙荧光组织化学方法 ,观察了戊四唑诱导的癫痫小鼠齿状回神经细胞ＤＮＡ和ＲＮＡ的变化。从而进一步阐明抗痫胶囊对癫痫小鼠基因表达的影响。１材料与方法１ １动物模型的建立选用健康昆明种小鼠 ,２级 (天津动物研究所提供 ) ,３０只 ,雌雄各半 ,体重１８～２２ｇ。动物分笼饲养 ,喂养３天后开始实验。随机分３组。正常组和病模组予灌胃服用蒸馏水 ,每次１ｍｌ,每天２次 ,连续５天 ;抗痫胶囊组予灌胃服用抗痫胶囊浓缩煎剂 (０．６６ｇ／ｍｌ) ,给药方法同前。均于第６天给１次药后３０分钟 ,正常对照组腹腔注射生理盐水 (５０ｍｇ／ｋｇ) ,其它两组腹腔注射戊四唑 (５０ｍｇ／ｋｇ)。５５分钟后开始实验。１ ２药物组成抗痫胶囊主要成分 :太子参、茯苓、半夏、陈皮、胆星、枳壳、天麻等 (天津中医学院第一附属医院药剂科提供 ,批号 :９９１２２６) ;０ ９%生理盐水注射液 (天津氨基酸公司生产 ,批号 :９９０３３０２) ;戊四唑(天津新亚制药厂生产 ,批号 :６１０３２５ -１)１ ３实验方法３组小鼠在相同条件下麻醉后开胸 ,从左心室依次灌注生理盐水３０～５０ｍｌ,４ %多聚甲醛磷酸缓冲液１５０～２００ｍｌ固定 ,２０～３０分钟灌毕 ,迅速断头取脑 ,置于４℃上述同样固定液中固定７～９小时后 ,移入２０ %蔗糖浸泡１２小时以上 ,恒冷箱冰冻切片 (５０ｕｍ)。２结果２ １正常小鼠齿状回ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布状况在荧光显微镜下 ,对照组小鼠齿状回神经细胞核ＤＮＡ呈黄绿色荧光 ,核仁的ＲＮＡ呈橘红色荧光 ,均匀分布于齿状回的颗粒细胞层和苔藓纤维系统 (如图１)。２ ２戊四唑致痫后小鼠齿状回ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布状况戊四唑致痫后 ,齿状回的ＤＮＡ和ＲＮＡ呈黄绿色和橘红色 ,荧光密度分布于齿状回的颗粒细胞层和苔藓纤维系统 ,荧光反应强度增强 (如图２)。２ ３抗痫胶囊高剂量组小鼠齿状回ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布状况抗痫胶囊高剂量组小鼠齿状回的ＤＮＡ呈淡黄色 ,ＲＮＡ呈橘红色 ,密度较高 ,均匀分布于颗粒细胞层和苔藓纤维系统 ,荧光强度较病模组浅 ,较正常组密度高 (如图３)。图１正常小鼠齿状回ＤＮＡ和ＲＮＡ荧光均匀分布颗粒细胞层和苔藓纤维。吖啶橙组织 化学法×２００图３抗痫胶囊高剂量组小鼠齿状回ＤＮＡ和ＲＮＡ荧光密度分布于齿状回的颗粒细胞层和苔藓纤维系统。吖啶橙组织化学法×２００讨论戊四唑造模在动物实验中已被广泛应用 ,其具有潜伏期相对较短 ,死亡率低的优点［１］。从生理而言 ,齿状回包括３层即分子层、颗粒细胞层、多形细胞层。颗粒细胞是齿状回的主要细胞 ,其细胞排列十分紧密 ,细胞之间几乎无胶质插入。其神经分布 ,在齿状回内形成以颗粒细胞为中心的广泛而有序的神经联系。总之 ,齿状回内部的神经纤维联系起源与颗粒细胞还状回内部的纤维联合 /连和投射。其传出投射只有苔藓纤维 ,它是齿状回与海马的神经纤维联系。腹腔注射戊四唑后 ,使兴奋性神经递质的含量骤然增加 ,通过颗粒细胞传入神经 ,传至齿状回与海马的神经纤维联系。中药抗痫胶囊具有健脾扶正 ,豁痰熄风之功效。临床通过对４２１例系统观察 ,总有效率为８３ ３７ % ,且临床无明显毒副作用［２］。方中使用太子参补气扶正 ,茯苓味甘、淡 ,性平 ,健脾宁心、理气健脾 ,以祛痰源 ;半夏、胆星化痰、祛痰 ,陈皮苦、平、温 ,配枳壳理气豁痰 ,天麻味甘、性平 ,平肝熄风而止痉 ;全蝎等熄风止惊。诸药合用 ,具有健脾扶正 ,豁痰熄风的功效。同时 ,现代药理学实验研究证明 :抗痫胶囊可以使戊四唑诱发的大白鼠脑电图阵发性棘波样改变的持续时间明显缩短［３］。天麻还能降低戊四氮所致动物惊厥率和死亡率 ,缩短阵挛时间 ,且多次长时间用药比单次用药效果佳。小鼠腹腔注射天麻水剂 ,能延长戊四唑阵挛性惊厥的潜伏期 ,明显提高戊四氮的半数对惊厥量 ,且对小鼠的自发活动有一定的抑制作用［４］。全蝎、胆星亦有抗惊厥 ,减少自发活动的作用。茯苓煎剂腹腔注射能明显降低小鼠的自发活动 ,并能对抗咖啡因所致小鼠过度兴奋 ,同时对戊巴比妥钠的麻醉作用有明显协同作用。石菖蒲的主要成分α、β细辛醚 ,分别具有抗电惊厥、戊四氮惊厥及中枢镇静作用。天麻可通过影响中枢不同脑区的儿茶酚胺类神经递质的代谢来协调脑兴奋和抑制的平衡 ［５］;石菖蒲提取液能延长小鼠跳台潜伏期、减少错误实验 ,提高迷宫实验正确率 ,并能延缓戊四唑所致的小鼠惊厥潜伏期［６］。故抗痫胶囊给药组的变化 ,考虑腹腔注射戊四唑后 ,兴奋性递质本应增加 ,但由于中药作用 ,使通过颗粒细胞传入神经及通过苔藓纤维的联合 /连和投射的兴奋性神经递质的释放受到抑制 ,且与药物的浓度有关。图２戊四唑致痫后小鼠齿状回ＤＮＡ和ＲＮＡ荧光密度分布于齿状回的颗粒 细胞层和苔藓纤维系统。吖啶橙组织化学法×２００高剂量抗痫胶囊对致痫小鼠齿状回DNA和RNA的影响@熊杰!300193$天津中医学院
@李新民!300193$天津中医学院第一附属医院
@窦志英!300193$天津中医学院
@杨常泉!300193$天津中医学院
@马融!300193$天津中医学院第一附属医院
@李积胜!300162$武警医学院戊四唑;;抗痫胶囊;;DNA和RNA;;齿状回;;小鼠目的 :探讨戊四唑对小鼠齿状回DNA和RNA的变化。方法 :选用健康昆明种小鼠 (2级 )40只 ,体重18～22g。分3组即正常对照组、病模组、高剂量抗痫胶囊组。采用吖啶橙荧光染色法 ,观察抗痫胶囊对戊四唑致痫后小鼠齿状回DNA和RNA的变化。结果 :与对照组相比 ,戊四唑致痫组小鼠齿状回颗粒层和苔藓纤维内DNA和RNA荧光染色强度增强 ,抗痫胶囊高剂量组较病模组荧光强度减弱 ,但高于正常组。结论 :齿状回神经元内DNA和RNA的变化与戊四唑致痫小鼠神经元的兴奋性损伤密切相关 ,抗痫胶囊对癫痫小鼠神经元兴奋性有一定的抑制作用。郑乃智 ,阮旭中 ,李震中 ,等 青霉素、戊四氮、美解眠癫痫模型的比较 临床脑电学杂志 ,1997 ,6(2) :101
李新民 ,马融 小儿抗痫胶囊的药理研究 中国医药学报 ,1993 ,(8) :增97
胡思源 ,于敏 ,向阳 ,等 中药抗痫胶囊对脑电图癫痫异常放电影响的临床与实验研究 中国实验方剂学杂志 1999 ,5(3) :21
阴健 ,郭力弓 中药现代研究与临床应用 第1版 北京 :学苑出版社 ,1993 141
解学孔 癫痫病学 第1版 北京 :人民卫生出版社 ,1995 134
张信岳 ,郑高利 ,寿燕 ,等 石菖蒲的以至和抗警觉作用研究 浙江中医学院学报 ,1999 ,23(4) :46天津市卫生局课题!(97034)笫笛?,提高迷宫实验正确率 ,并能延缓戊四唑所致的小鼠惊厥潜伏期［６］。故抗痫胶囊给药组的变化 ,考虑腹腔注射戊四唑后 ,兴奋性递质本应增加 ,但由于中药作用 ,使通过颗粒细胞传入神经及通过苔藓纤维的联合 /连和投射的兴奋性神经递质的释放受到抑制 ,且与药物的浓度有关。图２戊四唑致痫后小鼠齿状回ＤＮＡ和ＲＮＡ荧光密度分布于齿状回的颗粒 细胞层和苔藓纤维系统。吖啶橙组织化学法×２００高剂量抗痫胶囊对致痫小鼠齿状回DNA和RNA的影响@熊杰!300193$天津中医学院
@李新民!300193$天津中医学院第一附属医院
@窦志英!300193$天津中医学院
@杨常泉!300193$天津中医学院
@马融!300193$天津中医学院第一附属医院
@李积胜!300162$武警医学院戊四唑;;抗痫胶囊;;DNA和RNA;;齿状回;;小鼠目的 :探讨戊四唑对小鼠齿状回DNA和RNA的变化。方法 :选用健康昆明种小鼠 (2级 )40只 ,体重18～22g。分3组即正常对照组、病模组、高剂量抗痫胶囊组。采用吖啶橙荧光染色法 ,观察抗痫胶囊对戊四唑致痫后小鼠齿状回DNA和RNA的变化。结果 :与对照组相比 ,戊四唑致痫组小鼠齿状回颗粒层和苔藓纤维内DNA和RNA荧光染色强度增强 ,抗痫胶囊高剂量组较病模组荧光强度减弱 ,但高于正常组。结论 :齿状回神经元内DNA和RNA的变化与戊四唑致痫小鼠神经元的兴奋性损伤密切相关 ,抗痫胶囊对癫痫小鼠神经元兴奋性有一定的抑制作用。郑乃智 ,阮旭中 ,李震中 ,等 青霉素、戊四氮、美解眠癫痫模型的比较 临床脑电学杂志 ,1997 ,6(2) :101
李新民 ,马融 小儿抗痫胶囊的药理研究 中国医药学报 ,1993 ,(8) :增97
胡思源 ,于敏 ,向阳 ,等 中药抗痫胶囊对脑电图癫痫异常放电影响的临床与实验研究 中国实验方剂学杂志 1999 ,5(3) :21
阴健 ,郭力弓 中药现代研究与临床应用 第1版 北京
More abstracts about the 高剂量抗痫胶囊对致痫小鼠齿状回DNA和RNA的影响