血府逐瘀汤是清代名医王清任创立的治疗血府血瘀证的著名方剂。现代研究表明，该方对冠心病具有 良好的临床疗效［１，２］；动物实验显示，血府逐瘀汤加减可通过降低心肌耗氧量、增加心肌供 血保护犬急性心肌缺血心脏的泵血功能［３］。本实验以急性心肌缺血家兔为受试对象，观察血府 逐瘀汤对缺血心肌的保护作用及对心肌缺血所致的凝血、纤溶功能变化的调节作用，以期进一步明 确该方对冠心病、心肌梗塞的作用及作用机理。１材料与方法１．１药物血府逐瘀汤由当归９ｇ、 桃仁１２ｇ、红花３ｇ、枳壳６ｇ、赤芍６ｇ、柴胡３ｇ、甘草６ｇ、桔梗４．５ｇ、川芎４．５ ｇ、牛膝９ｇ组成。用重蒸水浸泡３０ｍｉｎ后，煎煮两次，合并煎煮液，过滤，浓缩至每ｍｌ药 液生药含量为１ｇ。所有药物均购自湖南中医学院第一附属医院药剂科。１．２主要仪器设备ＤＨ －１４０动物呼吸机（国产），ＧＬ－２０Ａ低温高速离心机（湘仪），ｏｈ呷阳全自动显微摄影仪（日本），ＩＸ１３ｍ型超薄切片机（瑞士），Ｈ一ｇｕ型电子显微镜（日本），ＧＸＭ—２０１酶标光度计（国产）， Ｕ’Ｖ７５４紫外可见光分光光度计（上海三分），ＣＬ－７Ｔｈ全自动生化分析仪（日本），Ｇ Ｃ－１２００’Ｍ放射免疫计数器（中佳光电），等。１．３动物及分组健康家兔２４只，由湖南中医学院实验动物中心提供，雌雄不拘，体重为１．５－２．ＳＫｇ。随机分为 ３组，分别为 １：假手术组、 １１：模型组、Ｉｌｌ：血府逐瘀汤组，每组 ８只动物。１．４实验方法动物于实验前 １２ｈ及 ｌｈ各灌胃 １次， Ｉ、 ｆｉ组均灌胃生理盐水，见组灌胃血府逐瘀汤，灌胃容量均为ｓｎｄＫｇ兔，剂量分别为８才问兔， 相当于ｅｄＫｇ成人经方日剂量的２倍。末次给药ｌｈ后，耳缘静脉注射２５％乌拉坦（４ｎｄ内 家兔）麻醉；仰卧固定；分离两侧颈总动脉后，气管插管（呼吸频率为１３次／ｎｄｎ）；于胸骨 正中左旁开Ｉｃｍ处行开胸术，剪开心但膜，暴露心脏；自冠状动脉左前降支根部穿线并结扎（假 手术组只穿线不结扎）。分别于结扎前、结扎后ｌｈ、结扎后３ｈ从颈总动脉取血，分别制备肝素 抗凝血、构檬酸钠抗凝血浆、乙二胺四乙酸二钠抗凝血浆及血清，待用。末次取血后，处死动物并 迅速分离心脏，取左心室前壁进行电镜及光镜观察；其余心肌作１０％匀浆，４℃，３５００ｒｐ ｔｕ离心１５ｎｄｎ后，收集上清液待用。１．５观察指标及方法１．５．ｌ心肌形态结构采用光 镜和电镜观察。标本用甲醛固定，石蜡包埋切片，Ｈ．Ｅ染色，贝Ｄ倍光镜观察并摄影。标本经３％戊二醛（０．ＩＩ’ｒｏｖＬＰＢＳ，ＰＨ７．２）预固定Ｚｈ，ｌ％俄酸后固定ｌｈ，３％Ｍ酸铀块染Ｚｈ，梯度两国脱水，Ｅｐｏｎ－８１２环氧树脂浸泡、包埋、切片，醋酸双 氧铀一拘檬酸错电子染色，电镜观察并摄影。１．５，２肌酸激酶（ＣＰＫ）采用速率法。试剂为 德国产品。１．５．３抗凝血酶Ｉｌｌ（ＡＴ－Ｉｌｌ）活性采用发色底物法测定。测试药盒为福 建太阳生物技术公司产品。１．５．４血浆６一酮一Ｋ不．含量及Ｄ乌含量采用放射免疫法测定。 测试药盒由苏州医学院血栓室提供。１．５．５组织型纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）及其抑制物（ＰＭ）活性采用发色底物法，测试药盒为福建太阳生物技术公司产 口ｐ口Ｏｌ，５．６组织匀浆蛋白质含量采用ＬＤｅｑ法测定。１．５．７统计学处理采用ＳＤＡＳ 统计软件统计分析。计量资料多组比较方差齐时进行方差分析，两两比较用ｑ检验；方差不齐时用 秩和检验。前后比较，方差齐时用成组ｔ检验，方差不齐时用ｔ’检验２结果２．ｌ动物死亡和数 据缺失情况实验过程中，假手术组和血府逐瘀汤组动物均坚持到实验观察完毕，未发生中途死亡； 而模型组合只动物中有３只动物分别于冠脉结扎后油田Ｍｎ、Ｚｂｏｎｄｎ及Ｚｌｌ３ｔ，ｌｌｌ ｌｎ死亡，死亡动物心肌均大面积梗死。２．２，Ｃ肌形态结构变化光镜观察结果显示，假手术组 心肌病理形态基本正常；模型组心肌出血、变性、灶性坏死，炎性细胞浸润；与模型组比较，而血 府逐瘀汤组心肌细胞变性坏死程度明显较轻，仅有少量的炎性细胞浸润。电镜观察结果表明，假手 术组（图１）心肌细胞超微结构基本正常，细胞核呈椭圆形，近核端可见大量线粒体和少量脂褐素 ，肌原纤维粗、细肌丝肌节和原纤维间线粒体均排列规则有序；模型组（图２）心肌细胞大多出现 明显的水泡变性改变，细胞核固缩、染色质边聚，肌原纤维呈带状凝聚，肌丝溶解，肌膜下可见巨 大水肿液泡，线粒体水肿空泡样变明显、晴断裂消失、基质透亮；与模型组比较，血府逐瘀汤组（ 图３）心肌细胞超微结构变化明显改善，仅少量线粒体肿胀、峪断裂，或有肌浆同扩张，基质透亮 。２．３血府逐瘀汤对血清肌被激酶变化的影响见表１。２．４血府逐瘀汤对血浆６一酮一ｎ不。 、Ｄ是含量变化的影响与缺血前比较，假手术组缺血ｌｈ和３ｈ６一酮一ＩＣＦ；。升高明显（Ｐ ＜ｏ．则，模型组显著升高（Ｐ＜ｏ．⑤，见血府逐瘀汤组含量随缺血时间延长变化不明显；３组之间Ｄ凡、Ｔ／Ｋ比值变化均无统计学意义（Ｐ＞０．历）。见表２。注：上行为缺血前、中行为缺血Ｉｈ、下行为缺血３ｂ。。表示与缺血前比较Ｐ＜０．ｆｆｉ。２． ５血府逐瘀汤对血浆ＡＴ一皿活性的影响随着缺血时间延长，假手术组和模型组ＡＴ一皿活性逐步 下降，其中假手术组缺血３ｈ下降尤为明显（Ｐ＜０．历），而血府逐瘀汤组变化不明显；其中， 血府还瘀汤组ＡＴ－Ｉｌｌ活性缺血前升高，模型组无明显改变。见表３。２．６血府逐瘀汤对血 浆ｔＰＡ、ＰＡＩ活性的影响缺血前３组之间ＰＡＩ活性基本一致。但血府逐瘀汤组ｔＰＡ活性明 显高于假手术组和模型组（Ｐ＜ｏ．历）；与缺血前比较，各组缺血后ｔＰＡ活性无明显改变，但假手术组、模型组缺血３ｂ后ＰＡＩ活性显著升高（Ｐ＜ｏ．０１）。见表４。注：与假手术组比较合Ｐ＜ｏ．历；与缺血前比较．。ｒ＜０刀！。３讨论本实验结果显示，心肌缺 血３ｂ后，心肌细胞无论在形态上还是在超微结构上均发生明显改变，表现在心肌出血、变性、灶 性坏死、炎性细胞浸润；心肌细胞出现明显的水泡变性改变，细胞核固缩、染色质边聚，肌原纤维 呈带状凝聚，肌丝溶解，线粒体水肿空泡样变、碑断裂消失、基质透亮，与以往的报道基本一致（ 人血清中磷酸肌酸激酶活性明显提高，表明该心肌梗死模型是成功的。缺血心肌一氧化氮含量明显 下降，表明冠脉舒张功能下降，心肌供血障碍。心肌缺血导致一系列血液学改变，如血管内皮── 血小项功能平衡紊乱：血管内皮抗血栓功能下降、血小板活化；机体凝血功能亢进而抗凝血功能降低；继发性纤溶功能亢进；血液流变学改变，血浆比粘度增高等一系列血瘀证微观病理变化。实验过程中，模型组有３只动物中途死亡，死亡率达３７．５％，而血府逐瘀汤组动物均坚持到实验 结束，表明血府逐瘀汤能明显提高家兔抗心肌缺血、缺氧能力，这与该方能改善血液流变学和心肌 缺血、心脏血流动力学、降低心肌耗氧量有密切关系【’、’１。细胞形态学结果显示：与模型组 比较，血府逐瘀汤组心肌细胞变性坏死程度较轻，仅有少量炎性细胞浸润；细胞超微结构明显改善 ，仅有少量线粒体肿胀、地断裂，或有肌浆同扩张、基质透亮；缺血ｌｈ和３ｈ时，血清ＣＰＫ活 性明显低于模型组，与假手术组基本接近；表明血府逐瘀汤能显著对抗心肌缺血所致的损伤，明显 改善心肌的形态及心肌细胞的超微结构。还能提高抗凝血酶见和组织型纤溶酶原激活物活性，改善 血管内皮一血小板功能、抑制血小板活化，这可能是该方抗急性心肌缺血损伤的重要机制之一。血府逐瘀汤抗家兔心肌缺血作用的实验研究@葛金文$湖南中医学院科技处!长沙410007
@陈大舜$湖南中医学院科技处!长沙410007
@朱惠斌$湖南中医学院科技处!长沙410007
@刘健华$湖南中医学院科技处!长沙410007
@田岳凤$湖南中医学院科技处!长沙4100071胡克武.湖北中医杂志1997;19(4):14
2汤志顺,等.安徽中医学院学报1997;16(6):25
3徐凤芹,等.中国中西医结合杂志1998;18(1):32
4杨友泌.等.针刺研究19862(2):143
5吴启富,等.实用中西医结合杂志1991;4(1):29Ｋ比值变化均无统计学意义（Ｐ＞０．历）。见表２。 注：上行为缺血前、中行为缺血Ｉｈ、下行为缺血３ｂ。。表示与缺血前比较Ｐ＜０．ｆｆｉ。２． ５血府逐瘀汤对血浆ＡＴ一皿活性的影响随着缺血时间延长，假手术组和模型组ＡＴ一皿活性逐步 下降，其中假手术组缺血３ｈ下降尤为明显（Ｐ＜０．历），而血府逐瘀汤组变化不明显；其中， 血府还瘀汤组ＡＴ－Ｉｌｌ活性缺血前升高，模型组无明显改变。见表３。２．６血府逐瘀汤对血 浆ｔＰＡ、ＰＡＩ活性的影响缺血前３组之间ＰＡＩ活性基本一致。但血府逐瘀汤组ｔＰＡ活性明 显高于假手术组和模型组（Ｐ＜ｏ．历）；与缺血前比较，各组缺血后ｔＰＡ活性无明显改变，但假手术组、模型组缺血３ｂ后ＰＡＩ活性显著升高（Ｐ＜ｏ．０１）。见表４。注：与假手术组比较合Ｐ＜ｏ．历；与缺血前比较．。ｒ＜０刀！。３讨论本实验结果显示，心肌缺 血３ｂ后，心肌细胞无论在形态上还是在超微结构上均发生明显改变，表现在心肌出血、变性、灶 性坏死、炎性细胞浸润；心肌细胞出现明显的水泡变性改变，细胞核固缩、染色质边聚，肌原纤维 呈带状凝聚，肌丝溶解，线粒体水肿空泡样变、碑断裂消失、基质透亮，与以往的报道基本一致（ 人血清中磷酸肌酸激酶活性明显提高，表明该心肌梗死模型是成功的。缺血心肌一氧化氮含量明显 下降，表明冠脉舒张功能下降，心肌供血障碍。心肌缺血导致一系列血液学改变，如血管内皮── 血小项功能平衡紊乱：血管内皮抗血栓功能下降、血小板活化；机体凝血功能亢进而抗凝血功能降低；继发性纤溶功能亢进；血液流变学改变，血浆比粘度增高等一系列血瘀证微观病理变化。实验过程中，模型组有３只动物中
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