抗宫炎颗粒为收载于卫生部药品标准《中药成方制剂》第11册的“抗宫炎片”改变剂型而得的四类新药<1> ,由广东紫珠、益母草、乌药等3味药材组成。具有清湿热,止带下之功。用于因慢性子宫颈炎引起的湿热下注证,赤白带下,宫颈糜烂,出血等症<1> 。方中臣药益母草的主要有效成分为生物碱,其中水苏碱(stachydrine)为主要成分之 一,且含量较高。现代药理研究表明,其具有兴奋子宫,减慢蛙心收缩频率等作用,也是抗宫炎颗 粒的有效成分。为有效控制质量,本文采用薄层扫描法测定盐酸水苏碱的含量。1 仪器与试剂岛津CS- 930 1PC薄层扫描仪(日本岛津) ;CAMAC薄层自动涂布器(瑞士CAMAC公司) ;定量毛细管(Drum mond .Scico .USA) ;盐酸水苏碱(中国药品生物制品检定所,批号712 - 94 0 2 ,供含量测定用) ;硅胶G(青岛海洋化工厂) ;抗宫炎颗粒(广西半宙制药集团,批号970 82 2 ,970 90 3,970 90 4 ) ;其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2 .1 层析条件 采用0 .5 %羧甲基纤维素钠的硅胶G板,两点法测定,供试品溶液8μL ,对照品溶液4 μL和8μL ;以正丁醇 盐酸 醋酸乙酯( 12∶4 .5∶1.5 )为展开剂,展开2次,第1次展开,取出,置10 5℃烘2 0min ,放冷,再置于新换的展开剂中展开,取出,置10 5℃烘2 0min ,放冷;以碘化铋钾试液和5 %三氯化铁无水乙醇溶液混合液( 5∶1)显色。2 .2 扫描条件及仪器参数 将盐酸水苏碱对照品甲醇液经薄层展开后的斑点,在波长370～70 0nm进行光谱扫描,测得其最大吸收波长为5 15nm ,故确定λS=5 15nm ,λR=6 5 0nm ;狭缝:0 .4mm×0 .4mm ;反射法,双波长锯齿扫描,散射系数SX =3。2 .3 标准曲线的绘制 精密称取盐酸水苏碱对照品,加甲醇制成每1mL含2mg的溶液。精密吸取盐酸水苏碱对照品溶液2 ,4 ,6 ,8,10 ,12 μL ,分别点于同一薄层板上。在上述条件下,显色、扫描和测定。以斑点的峰面积积分值为横坐标,点样量( μg)为纵坐标制作标准曲线,得线性回归方程:Y =3.16 2 3×10 -3 X +2 .4 10 7,r =0 .9995 ,n =6 ,表明盐酸水苏碱在4 .12～2 4 .72 μg范围内呈良好的线性关系。2 .4 加样回收试验 取本品10袋,精密称定,研细,取约18g ,精密称定,置2 5 0mL的锥形瓶中。精密加入3mL经稀释的盐酸水苏碱对照品(相当于3.96 5mg) ,精密加入乙醇15 0mL ,塞紧,称定重量,置80℃回流6h。放冷后,取下锥形瓶,密塞,称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过。弃去初滤液,精密量取续滤液5 0mL ,蒸干,加水10mL溶解后,加0 .6mol·L-1盐酸6mL ,滴入新配制的2 %雷氏盐溶液10mL ,冰箱中放置1h ,用G3 垂熔玻璃漏斗滤过。沉淀用少量冰水洗涤至滤液无色,加入丙酮洗脱至洗脱液无色,丙酮液中滴加0 .5 %硫酸银溶液至不再有沉淀生成,静置,用G4垂熔玻璃漏斗滤过。沉淀用丙酮3mL洗涤,合并洗液与滤液并浓缩至干。残渣加甲醇3mL使溶解,加入中性氧化铝柱(内径10mm ,10 0～2 0 0目,5 g)上,用70 %乙醇4 0mL洗脱,收集洗脱液,蒸干。残渣用甲醇溶解并转移至2mL量瓶内,加甲醇稀释至刻度,摇匀,点样,测定回收率。结果平均回收率为98.9% ,RSD为4 .2 %。2 .5 精密度试验2 .5 .1 仪器精度 依本法对盐酸水苏碱斑点进行连续6次扫描测定,结果差异小,5次测定为0 .2 4 9mg·g-1,RSD为1 .0 % ,n =5 ,表明仪器稳定。2 .5 .2 同板精度 在对同一板上5个相同点样量的斑点扫描测定,结果平均值为0 .2 5 1mg·g-1,RSD为1.0 % ,n =5。2 .5 .3 板间精度 依本法对5块薄层板上相同点样量样品的盐酸水苏碱斑点扫描测定,其结果为0 .2 5 4mg·g-1,RSD为1.5 % ,n =5。2 .6 稳定性实验 精密吸取对照品溶液4 μL ,点于上述薄层板上,每隔30min ,测定一次斑点的峰面积积分值,共测定6次。结果表明,盐酸水苏碱在薄层板上显色后30～180min内稳定,RSD为1.2 %。2 .7 样品含量测定 取本品5袋,精密称定,研细。取约36g ,精密称定,置2 5 0mL的锥形瓶中,按回收率测定项下方法进行样品提取,用外标两点法测定含量,结果见表1。表1 样品中盐酸水苏碱含量测定结果Tab 1 Determinationofstachydrinehydrochlorideinsamples批号 x/mg·g- 1 (n =2 ) RSD/ %970 82 2 0 .2 2 42 .4970 90 3 0 .2 2 2 2 .4970 90 40 .2 65 1.73 讨论盐酸水苏碱属季胺类生物碱,易溶于碱水中,往往难以用一般溶剂法将其提取出来。 根据盐酸水苏碱的性质,对提取方法做了多方面的摸索,结果以本试验采用的沉淀法即经典的雷氏 铵盐进行提取,过中性氧化铝柱净化的方法为最佳。本品为含益母草的中药复方制剂,在薄层展开过程中,其他成分对盐酸水苏碱的干扰严重。经试验正丁醇盐酸 水( 4∶1.5∶0 .5 )、正丁醇 盐酸水( 4∶1∶0 .5 )、正丁醇盐酸 醋酸乙酯( 12∶4 .5∶1.5 )等展开剂,一次展开后盐酸水苏碱斑点均未与杂质分开,呈长条拖尾状。经大量试验,本文建立了 二次展开系统,使盐酸水苏碱斑点与杂质斑点得到很好分离,稳定性和重现性好,适合于中药复方制剂中益母草的含量测定。薄层板每次展开后取出,均应置105℃烘箱中加热2 0min。因本展开剂是含正丁醇的体系,粘度大,所以展开后需加热2 0min ,尽量挥去薄层板中的正丁醇,否则影响斑点显色。由于水苏碱为水溶性物质,水苏碱斑点受湿度影 响很大,喷雾显色后应立即用冷风吹干,使斑点稳定清晰,便于扫描测定薄层扫描法测定抗宫炎颗粒中盐酸水苏碱的含量@罗轶$广西壮族自治区药品检验所!广西南宁530021
@龚秀珍$广西壮族自治区药品检验所!广西南宁530021抗宫炎颗粒;;薄层扫描法;;盐酸水苏碱目的 :采用薄层扫描法对抗宫炎颗粒中的盐酸水苏碱进行含量测定。方法 :以正丁醇 盐酸 醋酸乙酯 ( 12∶4 .5∶1.5 )为展开剂 ,2次展开。测定波长λS=5 15nm ,λR=6 5 0nm。结果 :本品加样回收率为 98.9% ,RSD为 4 .2 %。 3批样品中盐酸水苏碱含量分别为 0 .2 2 4 ,0 .2 2 2 ,0 .2 6 5mg·g-1。结论 :方法简便、可靠、实用 ,可用于该品种的质量控制<1> 卫生部药品标准.中药成方制剂.第11册
.1996. 87.则影响斑点显色。由于水苏碱为水溶性物质,水苏碱斑点受湿度影响很大,喷雾显色后应立 即用冷风吹干,使斑点稳定清晰,便于扫描测定薄层扫描法测定抗宫炎颗粒中盐酸水苏碱的含量@罗轶$广西壮族自治区药品检验所!广西南宁530021
@龚秀珍$广西壮族自治区药品检验所!广西南宁530021抗宫炎颗粒;;薄层扫描法;;盐酸水苏碱目的 :采用薄层扫描法对抗宫炎颗粒中的盐酸水苏碱进行含量测定。方法 :以正丁醇 盐酸 醋酸乙酯 ( 12∶4 .5∶1.5 )为展开剂 ,2次展开。测定波长λS=5 15nm ,λR=6 5 0nm。结果 :本品加样回收率为 98.9% ,RSD为 4 .2 %。 3批样品中盐酸水苏碱含量分别为 0 .2 2 4 ,0 .2 2 2 ,0 .2 6 5mg·g-1。结论 :方法简便、可靠、实用 ,可用于该品种的质量控制<1> 卫生部药品标准.中药成方制剂.第11册.1996.87.
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